使用方法(3步)
- 貼上標準點(數量、Ct)或載入 CSV 檔案。具有相同數量的列被视為重複測定。
- 選擇迴歸方法 (OLS/WLS) 和選項,例如 95% 帶。如果有未知的 Ct 值,請輸入它們。
- 按一下計算可查看標準曲線、效率、QC 檢查、未知估計值和步驟日誌。分享 URL 保持相同的設定。
建議流程
- 首先,建立標準曲線 (本頁)
- 接著,回顾PCR效率(%) → 跳转到效率
- 如果需要,計算相對表現量量 (ΔCt / ΔΔCt) → ΔCt / ΔΔCt
延伸使用
資料輸入與選項
結果(摘要)
PCR 效率 (%)
由斜率 m 計算為 Efficiency = (10^(-1/m) - 1) × 100。顯示的範圍僅供參考。
結果將出現在這里。
範圍是指南。對於研究/教育,一起审查標準點和殘差。
質量檢查(指南)
濃度水準(平均值±標準差)
| 數量 | log10Q | n | CT_平均值 | CT_SD |
|---|
標準點(擬合列)
可以切換高級欄(重量/yhat/殘差/杠杆/cooksD)。
| 數量 | log10Q | CT | 重量 | 是的 | 殘差 | 杠杆 | 厨师D |
|---|
未知样品(Ct → 數量)
| 样品 | CT | log10Q_帽子 | 數量_帽子 | DF | 校正數量 |
|---|
標準曲線和殘差
將鼠標悬停點可查看详细信息。
將鼠標悬停點可查看详细信息。
計算步驟(如何計算)
教育工作者須知
- 打開/關閉 OLS/WLS 和截距以比較斜率、殘差和 QC 指南的變化。
- 透過重複測定,每個水準的平均值和標準差有助於討論變異、離群值和權重。
常見问题
什麼是 qPCR 標準曲線?
透過擬合 Ct 與 log10(數量)將標準數量(拷貝數或濃度)與 Ct 關聯起來的曲線。它有助於檢查線性度 (R²) 和擴增效率。
需要多少標準分?
至少需要兩個點才能擬合一條線。對於線性和離群值檢查,建議使用 4-6 個點。
PCR 效率 (%) 是如何計算的?
根據坡度 m:效率 = (10^(-1/m) - 1) × 100。顯示的範圍僅供參考。
-3.32 附近的斜率表明什麼?
對於 10 倍稀釋系列,接近 -3.32 的斜率對應於約 100% 的表觀效率(理想指南)。
效率能超過 100% 嗎?
由於它是根據斜率推断的,因此由於稀釋誤差或抑制,可能会出現超過 100% 的表觀值。將其作為指南並檢查殘差和標準點。
分享 URL 是否包含資料?
僅儲存設定(方法和波段選項)。不包含標準和未知資料。
數量應該使用什麼單位?
任何單位都可以(拷貝數、ng、濃度)。 log10 的數量必須為正。
相關工具
參考文献(注释)
本頁顯示的指南是一般參考。對於研究/教育,請根據需要查閱主要來源。
評論
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