كيفية الاستخدام (3 خطوات)
- الصق النقاط القياسية (الكمية، Ct) أو قم بتحميل ملف CSV. يتم التعامل مع الصفوف التي لها نفس الكمية على أنها نسخ متماثلة.
- اختر طريقة الانحدار (OLS/WLS) وخيارات مثل نطاقات 95%. أدخل قيم Ct غير معروفة إذا كانت لديك.
- انقر فوق "حساب" لرؤية المنحنى القياسي والكفاءة وفحوصات مراقبة الجودة والتقديرات غير المعروفة وسجل الخطوات. تحتفظ عناوين URL المشاركة بنفس الإعدادات.
الترتيب الموصى به
- أولاً، قم ببناء منحنى قياسي (هذه الصفحة)
- بعد ذلك، قم بمراجعة كفاءة PCR (%) → انتقل إلى الكفاءة
- إذا لزم الأمر، احسب التعبير النسبي (ΔCt / ΔΔCt) → ΔCt / ΔΔCt
اذهب أعمق
- الانحدار الخطي والارتباط
كيفية قراءة المخلفات ونطاقات 95%
- إحصائيات وصفية
تحقق من تباين النسخ المتماثل
إدخال البيانات والخيارات
النتائج (ملخص)
PCR الكفاءة (%)
تحسب من المنحدر م كما Efficiency = (10^(-1/m) - 1) × 100. النطاق الموضح هو دليل.
تستخدم النتائج الأولية منحنى المعايرة الافتراضي؛ الصق بياناتك ثم احسب لتحديثها.
| n (النقاط) | 15 |
|---|---|
| k (المستويات) | 5 |
| الميل m | -3.32 |
| المقطع b | 38.24 |
| R² | 1 |
| الكفاءة (%) | 100.1 |
النطاقات هي أدلة. بالنسبة للبحث/التعليم، قم بمراجعة النقاط القياسية والبقايا معًا.
فحوصات الجودة (الدليل)
مستويات التركيز (يعني ± SD)
| الكمية | سجل10Q | ن | Ct_mean | Ct_SD |
|---|---|---|---|---|
| 1e+7 | 7 | 3 | 15 | 0.03 |
| 1e+6 | 6 | 3 | 18.32 | 0.03 |
| 100000 | 5 | 3 | 21.64 | 0.03 |
| 10000 | 4 | 3 | 24.96 | 0.03 |
| 1000 | 3 | 3 | 28.28 | 0.03 |
النقاط القياسية (صفوف ملائمة)
يمكن تبديل الأعمدة المتقدمة (الوزن / اليهات / المتبقي / الرافعة المالية / الطهاة د).
| الكمية | سجل10Q | ط م | الوزن | yhat | المتبقية | الرافعة المالية | طهاة د |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1e+7 | 7 | 14.97 | 1 | 15 | -0.03 | 0.2 | 0.203125 |
| 1e+7 | 7 | 15 | 1 | 15 | 0 | 0.2 | 0 |
| 1e+7 | 7 | 15.03 | 1 | 15 | 0.03 | 0.2 | 0.203125 |
| 1e+6 | 6 | 18.29 | 1 | 18.32 | -0.03 | 0.1 | 0.080247 |
| 1e+6 | 6 | 18.32 | 1 | 18.32 | 0 | 0.1 | 0 |
عينات غير معروفة (Ct → الكمية)
| عينة | ط م | log10Q_hat | الكمية_قبعة | مدافع | تم تصحيح الكمية |
|---|---|---|---|---|---|
| U1 | 20 | 5.493976 | 311871.654 | 1 | 311871.654 |
| U2 | 23.5 | 4.439759 | 27527.0097 | 1 | 27527.0097 |
المنحنى القياسي والبقايا
خطوات الحساب (كيف يتم الحساب)
ملاحظات للمعلمين
- قم بتبديل OLS/WLS وتشغيل/إيقاف الاعتراض لمقارنة كيفية تغير أدلة المنحدر والبقايا ومراقبة الجودة.
- مع التكرارات، يساعد المتوسط وSD لكل مستوى على مناقشة التباين والقيم المتطرفة والترجيح.
الأسئلة الشائعة
ما هو المنحنى القياسي qPCR؟
منحنى يربط الكمية القياسية (رقم النسخة أو التركيز) بـ Ct عن طريق تركيب Ct مقابل log10 (الكمية). يساعد في التحقق من الخطية (R²) وكفاءة التضخيم.
كم عدد النقاط القياسية المطلوبة؟
مطلوب نقطتين على الأقل لتناسب الخط. بالنسبة للخطية والفحوصات الخارجية، يوصى بـ 4-6 نقاط.
كيف يتم حساب كفاءة PCR (٪)؟
من المنحدر م: الكفاءة = (10^(-1/م) - 1) × 100. النطاق المعروض هو دليل.
إلى ماذا يشير الميل حول -3.32؟
بالنسبة لسلسلة تخفيف 10×، فإن المنحدر القريب من -3.32 يتوافق مع كفاءة واضحة تبلغ حوالي 100% (الدليل المثالي).
هل يمكن أن تتجاوز الكفاءة 100٪؟
لأنه يتم استنتاجه من المنحدر، يمكن أن تحدث قيم واضحة تزيد عن 100% بسبب خطأ التخفيف أو التثبيط. تعامل معه كدليل وتحقق من المخلفات والنقاط القياسية.
هل تتضمن المشاركة URL بيانات؟
يتم حفظ الإعدادات (الطرق وخيارات النطاق) فقط. لا يتم تضمين البيانات القياسية وغير المعروفة.
ما هي الوحدة التي يجب أن أستخدمها لقياس الكمية؟
أي وحدة جيدة (رقم النسخة، نانوغرام، التركيز). يجب أن تكون الكمية موجبة لـ log10.
الأدوات ذات الصلة
المراجع (الملاحظات)
الأدلة المعروضة في هذه الصفحة هي مراجع عامة. للبحث/التعليم، راجع المصادر الأولية حسب الحاجة.
التعليقات
مشاركة الأسئلة أو التحسينات (يتم تحميل التعليقات بعد النقر فوق الزر).