Cómo utilizar (3 pasos)
- Pega puntos estándar (Cantidad, Ct) o carga un archivo CSV. Las filas con la misma cantidad se tratan como réplicas.
- Elige un método de regresión (OLS/WLS) y opciones como bandas del 95%. Ingresa valores Ct desconocidos si los tiene.
- Haz clic en Calcular para ver la curva estándar, la eficiencia, las comprobaciones de control de calidad, las estimaciones desconocidas y el registro de pasos. Las URL compartidas mantienen la misma configuración.
Orden recomendado
- Primero, construye una curva estándar. (esta página)
- A continuación, revisa la eficiencia de PCR (%) → Saltar a la eficiencia
- Si es necesario, calcula la expresión relativa (ΔCt / ΔΔCt) → ΔCt / ΔΔCt
ir más profundo
- Regresión lineal y correlación
Cómo leer residuos y bandas del 95%
- Estadísticas descriptivas
Comprobar la variabilidad replicada
Entrada de datos y opciones
Resultados (resumen)
PCR eficiencia (%)
Calculado a partir de la pendiente m como Efficiency = (10^(-1/m) - 1) × 100. El rango mostrado es una guía.
Los resultados iniciales usan la curva estándar de ejemplo; pega tus datos y calcula para actualizarlos.
| n (puntos) | 15 |
|---|---|
| k (niveles) | 5 |
| pendiente m | -3.32 |
| intercepto b | 38.24 |
| R² | 1 |
| eficiencia (%) | 100.1 |
Los rangos son guías. Para investigación/educación, revisen juntos los puntos estándar y los residuales.
Controles de calidad (guía)
Niveles de concentración (media ± DE)
| Cantidad | log10Q | n | Ct_media | Ct_SD |
|---|---|---|---|---|
| 1e+7 | 7 | 3 | 15 | 0.03 |
| 1e+6 | 6 | 3 | 18.32 | 0.03 |
| 100000 | 5 | 3 | 21.64 | 0.03 |
| 10000 | 4 | 3 | 24.96 | 0.03 |
| 1000 | 3 | 3 | 28.28 | 0.03 |
Puntos estándar (filas ajustadas)
Las columnas avanzadas (peso / yhat / residual / apalancamiento / cooksD) se pueden alternar.
| Cantidad | log10Q | CT | peso | ŷ | residual | influencia | D de Cook |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1e+7 | 7 | 14.97 | 1 | 15 | -0.03 | 0.2 | 0.203125 |
| 1e+7 | 7 | 15 | 1 | 15 | 0 | 0.2 | 0 |
| 1e+7 | 7 | 15.03 | 1 | 15 | 0.03 | 0.2 | 0.203125 |
| 1e+6 | 6 | 18.29 | 1 | 18.32 | -0.03 | 0.1 | 0.080247 |
| 1e+6 | 6 | 18.32 | 1 | 18.32 | 0 | 0.1 | 0 |
Muestras desconocidas (Ct → Cantidad)
| muestra | CT | log10Q estimado | Cantidad estimada | DF | Cantidad_corregida |
|---|---|---|---|---|---|
| U1 | 20 | 5.493976 | 311871.654 | 1 | 311871.654 |
| U2 | 23.5 | 4.439759 | 27527.0097 | 1 | 27527.0097 |
Curva estándar y residuos
Pasos de cálculo (Cómo se calcula)
Notas para educadores
- Activa o desactiva OLS/WLS y el intercepto para comparar cómo cambian la pendiente, los residuos y las guías de control de calidad.
- Con réplicas, la media y la DE por nivel ayudan a analizar la variabilidad, los valores atípicos y la ponderación.
Preguntas frecuentes
¿Qué es una curva estándar qPCR?
Una curva que relaciona la cantidad estándar (número de copias o concentración) con Ct ajustando Ct frente a log10 (cantidad). Ayuda a comprobar la linealidad (R²) y la eficiencia de amplificación.
¿Cuántos puntos estándar se requieren?
Se requieren al menos dos puntos para ajustar una línea. Para comprobaciones de linealidad y valores atípicos, se recomiendan entre 4 y 6 puntos.
¿Cómo se calcula la eficiencia (%) de PCR?
Desde la pendiente m: Eficiencia = (10^(-1/m) - 1) × 100. El rango mostrado es una guía.
¿Qué indica una pendiente de alrededor de -3,32?
Para una serie de diluciones de 10×, una pendiente cercana a -3,32 corresponde a una eficiencia aparente de aproximadamente el 100% (guía ideal).
¿Puede la eficiencia superar el 100%?
Como se infiere a partir de la pendiente, pueden aparecer valores superiores al 100% por errores de dilución o inhibición. Trátalo como una guía y comprueba los residuos y los puntos estándar.
¿El enlace para compartir incluye datos?
Sólo se guardan las configuraciones (métodos y opciones de banda). No se incluyen datos estándar y desconocidos.
¿Qué unidad debo usar para la cantidad?
Cualquier unidad está bien (número de copias, ng, concentración). La cantidad debe ser positiva para log10.
Herramientas relacionadas
Referencias (notas)
Las guías que se muestran en esta página son referencias generales. Para investigación/educación, consulta fuentes primarias según sea necesario.
Comentarios
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