Como usar (3 passos)
- Cole os pontos padrão (Quantidade, Ct) ou carregue um arquivo CSV. Linhas com a mesma Quantidade são tratadas como réplicas.
- Escolha um método de regressão (OLS/WLS) e opções como bandas de 95%. Insira valores Ct desconhecidos, se os tiver.
- Clique em Calcular para ver a curva padrão, eficiência, verificações de CQ, estimativas desconhecidas e registro de etapas. Os URLs de compartilhamento mantêm as mesmas configurações.
Pedido recomendado
- Primeiro, construa uma curva padrão (esta página)
- A seguir, revise a eficiência de PCR (%) → Salte para a eficiência
- Se necessário, calcule a expressão relativa (ΔCt / ΔΔCt) → ΔCt / ΔΔCt
Vá mais fundo
- Regressão linear e correlação
Como ler resíduos e bandas de 95%
- Estatísticas descritivas
Verifique a variabilidade da replicação
Entrada de dados e opções
Resultados (resumo)
PCR eficiência (%)
Calculado a partir da inclinação m como Efficiency = (10^(-1/m) - 1) × 100. A faixa mostrada é um guia.
Os resultados iniciais usam a curva padrão de exemplo; cole seus dados e calcule para atualizá-los.
| n (pontos) | 15 |
|---|---|
| k (níveis) | 5 |
| inclinação m | -3.32 |
| intercepto b | 38.24 |
| R² | 1 |
| eficiência (%) | 100.1 |
Os intervalos são guias. Para pesquisa/educação, revise os pontos padrão e os resíduos juntos.
Verificações de qualidade (guia)
Níveis de concentração (média ± DP)
| Quantidade | log10Q | n | Ct_média | Ct_SD |
|---|---|---|---|---|
| 1e+7 | 7 | 3 | 15 | 0.03 |
| 1e+6 | 6 | 3 | 18.32 | 0.03 |
| 100000 | 5 | 3 | 21.64 | 0.03 |
| 10000 | 4 | 3 | 24.96 | 0.03 |
| 1000 | 3 | 3 | 28.28 | 0.03 |
Pontos padrão (ajustar linhas)
Colunas avançadas (peso/yhat/residual/alavancagem/cozinheirosD) podem ser alternadas.
| Quantidade | log10Q | CT | peso | sim | residual | alavancagem | cozinheirosD |
|---|---|---|---|---|---|---|---|
| 1e+7 | 7 | 14.97 | 1 | 15 | -0.03 | 0.2 | 0.203125 |
| 1e+7 | 7 | 15 | 1 | 15 | 0 | 0.2 | 0 |
| 1e+7 | 7 | 15.03 | 1 | 15 | 0.03 | 0.2 | 0.203125 |
| 1e+6 | 6 | 18.29 | 1 | 18.32 | -0.03 | 0.1 | 0.080247 |
| 1e+6 | 6 | 18.32 | 1 | 18.32 | 0 | 0.1 | 0 |
Amostras desconhecidas (Ct → Quantidade)
| Amostra | CT | log10Q_hat | Quantidade_chapéu | DF | Quantidade_corrigida |
|---|---|---|---|---|---|
| U1 | 20 | 5.493976 | 311871.654 | 1 | 311871.654 |
| U2 | 23.5 | 4.439759 | 27527.0097 | 1 | 27527.0097 |
Curva padrão e resíduos
Etapas de cálculo (como é calculado)
Notas para educadores
- Ative/desative OLS/WLS e interceptação para comparar como a inclinação, os resíduos e as guias de CQ mudam.
- Com réplicas, a média e o DP por nível ajudam a discutir variabilidade, valores discrepantes e ponderação.
Perguntas frequentes
O que é uma curva padrão qPCR?
Uma curva que relaciona a quantidade padrão (número de cópias ou concentração) a Ct ajustando Ct vs log10(quantidade). Ajuda a verificar a linearidade (R²) e a eficiência da amplificação.
Quantos pontos padrão são necessários?
São necessários pelo menos dois pontos para ajustar uma linha. Para verificações de linearidade e valores discrepantes, são recomendados 4–6 pontos.
Como é calculada a eficiência de PCR (%)?
Da inclinação m: Eficiência = (10^(-1/m) - 1) × 100. O intervalo exibido é um guia.
O que indica uma inclinação em torno de -3,32?
Para uma série de diluições de 10x, uma inclinação próxima de -3,32 corresponde a uma eficiência aparente de cerca de 100% (guia ideal).
A eficiência pode exceder 100%?
Por ser inferido a partir da inclinação, valores aparentes acima de 100% podem ocorrer devido a erro de diluição ou inibição. Trate-o como um guia e verifique os resíduos e os pontos padrão.
O compartilhamento URL inclui dados?
Somente as configurações (métodos e opções de banda) são salvas. Dados padrão e desconhecidos não estão incluídos.
Que unidade devo usar para Quantidade?
Qualquer unidade serve (número de cópia, ng, concentração). A quantidade deve ser positiva para log10.
Ferramentas relacionadas
Referências (notas)
Os guias mostrados nesta página são referências gerais. Para pesquisa/educação, consulte fontes primárias conforme necessário.
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