Comment utiliser (3 étapes)
- Collez les points standards (Quantité, Ct) ou chargez un fichier CSV. Les lignes avec la même quantité sont traitées comme des répliques.
- Choisissez une méthode de régression (OLS/WLS) et des options telles que les bandes à 95 %. Entrez les valeurs Ct inconnues si vous en avez.
- Cliquez sur Calculer pour voir la courbe standard, l'efficacité, les contrôles CQ, les estimations inconnues et le journal des étapes. Les URL de partage conservent les mêmes paramètres.
Commande recommandée
- Tout d’abord, construisez une courbe standard (cette page)
- Ensuite, examinez l'efficacité de PCR (%) → Passez à l'efficacité
- Si nécessaire, calculez l'expression relative (ΔCt / ΔΔCt) → ΔCt / ΔΔCt
Allez plus loin
- Régression linéaire et corrélation
Comment lire les résidus et les bandes 95 %
- Statistiques descriptives
Vérifier la variabilité des réplications
Saisie des données et options
Résultats (résumé)
PCR efficacité (%)
Calculé à partir de la pente m comme Efficiency = (10^(-1/m) - 1) × 100. La plage indiquée est un guide.
Les résultats apparaîtront ici.
Les plages sont des guides. Pour la recherche/l’éducation, examinez ensemble les points standards et les résidus.
Contrôles qualité (guide)
Niveaux de concentration (moyenne ± écart-type)
| Quantité | log10Q | n | Ct_moyenne | Ct_SD |
|---|
Points standards (ajuster les lignes)
Les colonnes avancées (poids/yhat/résiduel/effet de levier/cooksD) peuvent être basculées.
| Quantité | log10Q | CT | poids | ouais | résiduel | effet de levier | cuisiniersD |
|---|
Échantillons inconnus (Ct → Quantité)
| Échantillon | CT | log10Q_hat | Quantité_chapeau | DF | Quantité_corrigée |
|---|
Courbe standard et résidus
Étapes de calcul (Comment c'est calculé)
Notes pour les éducateurs
- Activez/désactivez OLS/WLS et l'interception pour comparer l'évolution de la pente, des résidus et des guides QC.
- Avec les répétitions, la moyenne et l'écart-type par niveau aident à discuter de la variabilité, des valeurs aberrantes et de la pondération.
FAQ
Qu'est-ce qu'une courbe standard qPCR ?
Une courbe qui relie la quantité standard (nombre de copies ou concentration) à Ct en ajustant Ct vs log10 (quantité). Il permet de vérifier la linéarité (R²) et l'efficacité de l'amplification.
Combien de points standards sont requis ?
Au moins deux points sont nécessaires pour correspondre à une ligne. Pour les contrôles de linéarité et de valeurs aberrantes, 4 à 6 points sont recommandés.
Comment l'efficacité PCR (%) est-elle calculée ?
À partir de la pente m : Efficacité = (10^(-1/m) - 1) × 100. La plage affichée est un guide.
Qu'indique une pente autour de -3,32 ?
Pour une série de dilutions 10×, une pente proche de -3,32 correspond à une efficacité apparente d'environ 100% (guide idéal).
L’efficacité peut-elle dépasser 100 % ?
Comme cela est déduit de la pente, des valeurs apparentes supérieures à 100 % peuvent se produire en raison d'une erreur de dilution ou d'une inhibition. Traitez-le comme un guide et vérifiez les résidus et les points standards.
Le partage URL inclut-il des données ?
Seuls les paramètres (méthodes et options de bande) sont enregistrés. Les données standard et inconnues ne sont pas incluses.
Quelle unité dois-je utiliser pour la quantité ?
N'importe quelle unité convient (nombre de copies, ng, concentration). La quantité doit être positive pour log10.
Outils associés
Références (notes)
Les guides présentés sur cette page sont des références générales. Pour la recherche/l’éducation, consulter les sources primaires au besoin.
Commentaires
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