Calcolatrice A260 (concentrazione e purezza del DNA/RNA)

Risposta rapida

Se disponi di una lettura NanoDrop o di uno spettrofotometro, questa pagina indica la concentrazione di DNA/RNA, A260/280, A260/230 e la resa totale opzionale in un unico passaggio.

Utile per un rapido triage dei campioni prima della qPCR, della pulizia, della preparazione delle librerie o della conversione del numero di copie.

Come utilizzare (3 passaggi)

Selezionare il tipo di acido nucleico (dsDNA/RNA, ecc.) e inserire A260/A280/A230.
Se misurato con diluizione, inserire il fattore di diluizione (nessuna diluizione = 1).
La concentrazione e i rapporti vengono visualizzati automaticamente. Aggiungi volume per vedere l'importo totale.

Casi d'uso tipici: verificare se un'estrazione è sufficientemente pulita, decidere se rimisurare dopo la correzione del bianco o preparare un trasferimento ai flussi di lavoro qPCR/NGS.

I fattori A260 e le guide sui rapporti variano in base al campione e alle condizioni. Sono mostrati come riferimenti; conferma con il tuo test.

Dati (tipo, A260/A280/A230, diluizione)

Esempio (preimpostato)

—

Tipo di acido nucleico

Fattore F (μg/ml per A260=1)

dsDNA=50 e RNA=40 sono guide comuni. Se necessario, utilizza un fattore personalizzato.

A260 (richiesto)

A280 (opzionale)

A230 (opzionale)

Diluizione preimpostata

Fattore di diluizione D (nessuna diluizione = 1)

Calcolare l'importo totale dal volume

Preimpostazione del volume

Volume (μL)

Correzione del bianco (opzionale)

Molti strumenti applicano già la correzione del bianco. Abilita solo se necessario.

Usa la correzione del bianco

A260 vuoto

A280 vuoto

A230 vuoto

Risultati (concentrazione e rapporti)

I risultati verranno visualizzati qui una volta immessi i valori.

Concentrazione (ng/μL)

—

Concentrazione (μg/mL)

—

A260/280

—

A260/230

—

Fattore di diluizione

—

Guida A260/280: — Guida A260/230: —

Informazioni sulle guide sui rapporti (riferimento)

—

1 µg/mL = 1 ng/μL (stesso valore numerico).

L'interpretazione del rapporto dipende dal test; questo calcolatore non dà giudizi definitivi.

Esporta (copia/CSV/LaTeX/condividi URL)

Come viene calcolato

Concentrazione (μg/mL) = A260 × fattore × diluizione (dsDNA=50, RNA=40 sono indicazioni)
A260/280 = A260 ÷ A280 (A280 ≠ 0)
A260/230 = A260 ÷ A230 (A230 ≠ 0)
L'inserimento del volume calcola la quantità totale (ng/μg)

Domande frequenti

Il fattore dsDNA è pari a 50 fisso?

Si tratta di una guida comunemente utilizzata, ma può variare in base al campione e alle condizioni. Se necessario, utilizza un fattore personalizzato.

Cosa indicano A260/280 e A260/230?

Vengono spesso citati come guide per la contaminazione da proteine o sale/solventi, ma non sono definitivi.

Cosa mostra l'immissione del volume?

Calcola la quantità totale (ng/μg) nella provetta dalla concentrazione.

Ho bisogno di una correzione in bianco?

Molti strumenti correggono internamente. Abilitalo solo se necessario.

I dati vengono inviati da qualche parte?

Tutti i calcoli vengono eseguiti nel tuo browser; i dati non vengono inviati.

Cosa fare dopo aver ottenuto un risultato A260

Utilizzare A260 come controllo di primo passaggio

A260 è utile per una stima rapida della concentrazione e un controllo iniziale della purezza. Usalo per decidere su diluizione, purificazione o passaggio successivo, non come unica prova finale.

Controllare insieme concentrazione e rapporti

Un campione può avere una concentrazione accettabile ma rapporti A260/280 o A260/230 instabili. Leggi i tre valori insieme. Se cambiano molto dopo bianco o nuova diluizione, ripulisci o rimisura il campione.

Quando confermare con un altro metodo

Per librerie, qPCR o campioni a bassa resa, conferma spesso la concentrazione con fluorescenza o con il metodo del laboratorio. È utile quando A260 e resa attesa non concordano.

Flusso di controllo ripetuto

Misura una volta, registra le assorbanze grezze e prova la correzione del bianco solo se non è già applicata. Poi confronta una diluizione alternativa. Se il risultato resta stabile, di solito puoi procedere.

Trasferimento agli strumenti a valle

Quando la concentrazione è credibile, convertila in molarità o copie per la pianificazione. Passa poi a qPCR o normalizzazione libreria solo con misure già controllate.

Guida rapida al passaggio successivo

Se la concentrazione sembra plausibile ma A260/280 o A260/230 cambia molto, ripetere la misurazione o rivedere la correzione del bianco prima di riportare il valore.
Se il campione ha una resa bassa o è importante dal punto di vista operativo, confermare la concentrazione con un test basato sulla fluorescenza prima di elaborare un piano di diluizione finale.
Se il campione è accettabile ed è necessaria l'analisi dell'espressione, continuare con la curva standard qPCR o il flusso di lavoro ΔΔCt.
Se il campione è accettabile e si stanno preparando librerie o raggruppamenti in pool, convertirlo prima in nM e quindi utilizzare il flusso di lavoro di concentrazione delle librerie NGS.

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