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biología molecular clonación

Calculadora de mezcla de ensamblaje de ADN (Gibson / Golden Gate)

Calcula la masa y el volumen de ADN requeridos a partir de las relaciones molares vector/inserto para Gibson o Golden Gate. Si se proporcionan concentraciones, se calculan los volúmenes y el agua restante para la reacción total.

Todos los cálculos se ejecutan en tu navegador. No se envían datos.

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Cómo utilizar (3 pasos)

  1. Selecciona un ejemplo o ingresa la longitud del fragmento (pb) y la concentración (ng/μL) para el backbone y las inserciones.
  2. Elige la relación molar (por ejemplo, insertos 2×) y la cantidad de backbone (pmol o ng).
  3. Aparecerán la masa requerida (ng) y el volumen (μL), además de una receta (mezcla maestra/reactivos y agua restante).

Esta es una calculadora de cantidades. Las condiciones recomendadas varían según el kit y el protocolo, así que sigue tu protocolo. Los ajustes preestablecidos de reactivos Golden Gate son ejemplos únicamente para cálculo.

Entradas (tabla de fragmentos)

—

Las proporciones molares reflejan el número de moléculas. Diferentes longitudes significan diferentes recuentos de moléculas con la misma masa.
Detalles (peso molecular por pb)
Usa 660 g/mol/pb como valor aproximado para ADN bicatenario (dsDNA).
Nombre Rol Longitud (pb) Concentración (ng/μL) Acciones
Pegar TSV (opcional)

Pegar desde Excel/Hojas (separado por tabulaciones).

Resultados

Agua restante (μL)
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Volumen total de ADN (μL)
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Masa total de ADN (ng)
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2× mezcla maestra volumen (μL)
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Fragmento Rol Longitud (pb) Objetivo (pmol) Masa (ng) Volumen (μL) Nota

Esta herramienta calcula cantidades únicamente. No garantiza el éxito.

Cómo se calcula

  1. Como aproximación de ADN bicatenario (dsDNA), pmol = (masa_ng × 1000) / (pb × 660).
  2. Establece la cantidad del vector (pmol para Gibson, ng para Golden Gate) y calcula sus pmol.
  3. Cada objetivo de inserción es insert_target_pmol = backbone_pmol × relación, luego convertido a masa (ng).
  4. Si se conoce la concentración (ng/μL), volumen = masa / conc. da volumen (μL).
  5. El agua restante se calcula a partir del volumen total de reacción menos la mezcla maestra/reactivos y el volumen de ADN.

Los valores son orientativos. Sigue las condiciones finales de tu kit o protocolo.

Preguntas frecuentes

¿Cuál es la diferencia entre Gibson y Golden Gate?
Ambos ensamblan fragmentos de ADN, pero los mecanismos de reacción y las enzimas difieren. Esta herramienta calcula cuánto ADN mezclar.
¿Por qué utilizar proporciones molares?
Los fragmentos de diferentes longitudes tienen diferentes recuentos de moléculas con la misma masa. Las proporciones molares mantienen constante el recuento de moléculas.
¿Qué proporciones se usan comúnmente?
Como regla general, los insertos suelen ser 2× o 3× el backbone. Depende del ensamblaje y debe probarse.
¿Puedo usar esto sin valores de concentración?
Sí. Aún puedes calcular la masa requerida (ng). Los volúmenes (μL) se muestran solo cuando se proporcionan las concentraciones.
Mis volúmenes son extremadamente pequeños (por ejemplo, 0,1 µL).
Los volúmenes muy pequeños son propensos a errores. Considera diluciones intermedias o ajusta la cantidad de backbone y el volumen de reacción.
¿Puedo utilizar los ajustes preestablecidos de reactivos Golden Gate tal como están?
Los volúmenes de reactivo dependen del kit y del protocolo. Los ajustes preestablecidos son solo ejemplos de cálculo; sigue tu protocolo.
¿Estas cantidades garantizarán el éxito?
No. Esta herramienta solo calcula cantidades. El éxito depende del diseño, la calidad del ADN y las condiciones de reacción.