कैसे उपयोग करें (3 चरण)
- एक उदाहरण चुनें या backbone और insert के लिए लंबाई (bp) और सांद्रता (ng/μL) दर्ज करें.
- molar ratio चुनें, जैसे 2× insert, और backbone की मात्रा (pmol या ng) भरें.
- आवश्यक द्रव्यमान, आयतन और शेष पानी तुरंत दिखेगा.
यह मात्रा कैलकुलेटर है. अंतिम शर्तें किट और प्रोटोकॉल पर निर्भर करती हैं. Golden Gate reagent preset केवल उदाहरण हैं.
इनपुट (खंड तालिका)
परिणाम
शेष पानी (µL)
—
कुल DNA आयतन (μL)
—
कुल DNA द्रव्यमान (एनजी)
—
2× मास्टर मिक्स आयतन (μL)
—
| टुकड़ा | भूमिका | लंबाई (बीपी) | लक्ष्य (pmol) | मास (एनजी) | आयतन (μL) | नोट |
|---|
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यह उपकरण केवल राशियों की गणना करता है. यह सफलता की गारंटी नहीं देता.
इसकी गणना कैसे की जाती है
- एक dsDNA सन्निकटन के रूप में, pmol = (द्रव्यमान_एनजी × 1000) / (बीपी × 660).
- backbone राशि तय करें और उससे backbone pmol निकालें.
- हर insert के लिए लक्ष्य pmol = backbone pmol × अनुपात, फिर उसे द्रव्यमान में बदलें.
- सांद्रता ज्ञात हो तो आयतन = द्रव्यमान / सांद्र से μL निकालें.
- शेष पानी = कुल प्रतिक्रिया मात्रा - master mix/reagent - DNA मात्रा.
मूल्य मार्गदर्शक होते हैं। अंतिम स्थितियों के लिए अपने किट/प्रोटोकॉल का पालन करें।
सामान्य प्रश्न
Gibson और Golden Gate के बीच क्या अंतर है?
दोनों DNA टुकड़े जोड़ते हैं, लेकिन एंजाइम और प्रतिक्रिया तंत्र अलग होते हैं. यह टूल केवल मात्रा निकालता है.
दाढ़ अनुपात का उपयोग क्यों करें?
अलग लंबाई के टुकड़ों में समान द्रव्यमान पर अणुओं की संख्या अलग होती है. molar ratio इसे संतुलित रखता है.
आमतौर पर कौन से अनुपात का उपयोग किया जाता है?
अक्सर insert ratio 2× या 3× backbone रखा जाता है. सही मान assembly पर निर्भर करता है.
क्या मैं इसे एकाग्रता मूल्यों के बिना उपयोग कर सकता हूँ?
हाँ. द्रव्यमान निकाल सकते हैं. volume तभी दिखता है जब सांद्रता दी गई हो.
मेरे वॉल्यूम बेहद छोटे हैं (उदाहरण के लिए, 0.1 μL)।
बहुत छोटी मात्राएँ त्रुटि-प्रवण होती हैं. intermediate dilution या बड़ी reaction volume पर विचार करें.
क्या मैं Golden Gate अभिकर्मक प्रीसेट का उपयोग यथावत कर सकता हूँ?
reagent मात्रा किट और प्रोटोकॉल पर निर्भर करती है. preset केवल उदाहरण हैं.
क्या ये राशियाँ सफलता की गारंटी देंगी?
नहीं. यह टूल केवल मात्रा की गणना करता है. सफलता डिज़ाइन, DNA गुणवत्ता और reaction condition पर निर्भर करती है.