使用方法（3步）
- 選擇一個範例或輸入引物序列（正向/反向）。
- 如果需要，調整方法和條件（Na+、引物濃度）。
- 顯示了 Tm 和退火溫度指南 (Ta)。
Tm 和 Ta 是嚮導。最終條件取決於試劑、儀器和模板質量；如果需要，使用梯度 PCR 進行優化。
輸入（引物序列）
結果（Tm / Ta 指南）
使用方法
—
| 引物 | 溫度 | 長度 | 氣相色譜% |
|---|---|---|---|
| 前進 | — | — | — |
| 反向 | — | — | — |
ΔTm
—
塔（導遊）
—
搜尋範圍（Ta±3°C）
—
方法比較（參考）
| 引物 | 最近鄰 | 鹽調節 | 華萊士 |
|---|
當存在 IUPAC 基（N/R/Y 等）時，不應用最近鄰。
分享 URL / 匯出
計算方法
- 推薦（最近鄰）：總結二核苷酸熱力學 (ΔH/ΔS) 並應用 Na+ 校正和引物濃度。
- 基本（鹽調節）：根據 GC%、長度和 Na+ 估算 Tm。
- 很簡單（華萊士）：根據 A/T 和 G/C 計數進行粗略估計（最適合短寡核苷酸）。
- 塔（導遊）：較低的 Tm 減去偏移量（預設 3°C），加上建議範圍 (Ta ± 3°C)。
如果存在 IUPAC 基（N/R/Y 等），則不應用最近鄰法並使用簡單方法。
常見問題
什麼是Tm（熔化溫度）？
Tm 是大約一半 DNA 雙鏈體變性的溫度。它取決於長度、GC% 和鹽條件。
退火溫度應該如何選擇？
該工具顯示 Ta（較低的 Tm 減去偏移量）作為指導。需要時使用梯度 PCR 進行優化。
為什麼有多個公式？
不同的公式做出不同的假設。最近鄰更詳細；簡單的公式和華萊士可以快速估算。
鹽濃度會影響Tm嗎？
是的。較高的鹽通常可以穩定雙鏈體並提高 Tm。
如果正向/反向 Tm 相差很大怎麼辦？
大的 ΔTm 表明更寬的溫度範圍（梯度 PCR）或重新設計引物。
我的序列被髮送到任何地方嗎？
不會。所有計算都在你的瀏覽器中執行，並且不會發送任何資料。
相關工具
反饋意見
如果你發現問題或想要某個功能，請告訴我們。