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NGS 實驗室工作流程

次世代定序文庫濃度:nM 換算、稀釋與合併

將 NGS 文庫濃度從 ng/μL 和片段長度 (bp) 轉換為 nM,然後計算標準化稀釋度和合併(等體積或等莫耳)。支援多樣本表和複製/匯出。

本頁僅供教育與研究輔助用途,不能取代正式實驗設計、統計審查、臨床判讀或安全規範。

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使用方法(3步)

  1. 選擇一個範例或輸入文庫濃度(ng/μL 或 nM)和片段長度 (bp)。
  2. 選擇目標 nM 和最終體積以查看稀釋配方(原液 + 水)。
  3. 選擇合併方法並查看每個文庫的體積和合併的 nM(參考)。

nM 換算取決於片段長度、分子量係數和定量方法。請把結果作為參考,並依你的實驗流程做最終決定。

輸入(庫表)

直接從 Excel/Sheets 貼上(製表符或逗號分隔)。範例列:name、ng_per_uL、length_bp、nM(欄位名稱可能有所不同)。

名稱 輸入方式 納克/微升 長度(bp/nt) nM(輸入) 濃度 (nM) 行動

表格水平滾動(滑動或拖動)。

分子類型(dsDNA等)

dsDNA (660 g/mol/bp) 是 NGS 的通用參考。值可能因方法和定義而異。

標準化(稀釋以匹配 nM)

池化

結果(轉換、稀釋、合併)

名稱 庫存 (nM) 稀釋:原液 (µL) 稀釋:水 (μL) 池體積 (µL)

計算方法

換算取決於長度、MW 係數和定量方法。請將這些結果作為參考。

常見問題

ng/μL → nM 轉換有何用途?

使用此工具可依分子數將文庫標準化,方便進行等莫耳合併(不同於等質量合併)。

從哪裡可以獲得片段長度 (bp)?

使用生物分析儀/TapeStation 報告中的平均大小。保持適配器包含與報告定義一致。

等質量和等莫耳合併有什麼差別?

等質量會對齊 ng 值,等莫耳會對齊分子數 (nM)。如果片段長度不同,相同品質不代表分子數相同。

什麼是常態化?

先將所有文庫稀釋到相同 nM,再以等體積合併。此工具會提供建議流程。

稀釋體積太小(例如 0.2 µL)。

非常小的體積很難移液。考慮中間稀釋或調整最終體積。

我可以使用 qPCR 中的 nM(或 pM)值嗎?

是的。使用直接nM輸入模式。請注意,量化定義可能因方法而異。

合併濃度準確嗎?

它是一個參考。定量和移液錯誤以及片段長度變化可能會改變最終值。

評論

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