使用方法(3步)
- 選擇一個範例或輸入文庫濃度(ng/μL 或 nM)和片段長度 (bp)。
- 選擇目標 nM 和最終體積以查看稀釋配方(原液 + 水)。
- 選擇合併方法並查看每個文庫的體積和合併的 nM(參考)。
nM 換算取決於片段長度、分子量係數和定量方法。請把結果作為參考,並依你的實驗流程做最終決定。
輸入(庫表)
結果(轉換、稀釋、合併)
| 名稱 | 庫存 (nM) | 稀釋:原液 (µL) | 稀釋:水 (μL) | 池體積 (µL) |
|---|
—
計算方法
- 換算(參考):nM = (ng/μL) × 1e6 / (長度 × MW_per_bp)
- 稀釋:C1V1 = C2V2 (V_stock = (C_target/C_stock) × V_final)
- 直接等莫耳合併:分配體積,使 C_i × V_i 相等(給定總體積)
換算取決於長度、MW 係數和定量方法。請將這些結果作為參考。
常見問題
ng/μL → nM 轉換有何用途?
使用此工具可依分子數將文庫標準化,方便進行等莫耳合併(不同於等質量合併)。
從哪裡可以獲得片段長度 (bp)?
使用生物分析儀/TapeStation 報告中的平均大小。保持適配器包含與報告定義一致。
等質量和等莫耳合併有什麼差別?
等質量會對齊 ng 值,等莫耳會對齊分子數 (nM)。如果片段長度不同,相同品質不代表分子數相同。
什麼是常態化?
先將所有文庫稀釋到相同 nM,再以等體積合併。此工具會提供建議流程。
稀釋體積太小(例如 0.2 µL)。
非常小的體積很難移液。考慮中間稀釋或調整最終體積。
我可以使用 qPCR 中的 nM(或 pM)值嗎?
是的。使用直接nM輸入模式。請注意,量化定義可能因方法而異。
合併濃度準確嗎?
它是一個參考。定量和移液錯誤以及片段長度變化可能會改變最終值。
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