Cómo utilizar (3 pasos)
- Elige un ejemplo o ingresa la concentración de la biblioteca (ng/μL o nM) y la longitud del fragmento (pb).
- Selecciona un nM objetivo y un volumen final para ver una receta de dilución (caldo + agua).
- Elige un método de agrupación y revisa los volúmenes por biblioteca y los nM agrupados (guía).
La conversión a nM depende de la longitud, los factores MW y el método de cuantificación. Trata los resultados como una guía y sigue tu protocolo para las decisiones finales.
Entradas (tabla de biblioteca)
Resultados (conversión, dilución, combinación)
| Nombre | Existencias (nM) | Dilución: stock (μL) | Dilución: agua (μL) | Volumen de la combinación (μL) |
|---|
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Cómo se calcula
- Conversión (guía): nM = (ng/μL) × 1e6 / (longitud × MW_per_bp)
- Dilución: C1V1 = C2V2 (V_stock = (C_objetivo/C_stock) × V_final)
- Agrupación directa de iguales molares: asigne volúmenes de modo que C_i × V_i sea igual (dado el volumen total)
La conversión depende de la longitud, los factores MW y el método de cuantificación. Usa estos resultados como guía.
Preguntas frecuentes
¿Para qué se usa la conversión ng/μL → nM?
Úsalo para normalizar bibliotecas por recuento de moléculas en mezclas equimolares, distinto de mezclar por masa igual.
¿De dónde obtengo la longitud del fragmento (pb)?
Usa el tamaño promedio de un informe de Bioanalyzer/TapeStation. Mantén la inclusión del adaptador coherente con la definición del informe.
¿Cuál es la diferencia entre agrupación de igual masa y de igual molar?
Una masa igual coincide con los valores de ng, mientras que un molar igual coincide con los recuentos de moléculas (nM). Si las longitudes difieren, una masa igual no igualará el número de moléculas.
¿Qué es la normalización?
Normaliza diluyendo todas las bibliotecas al mismo nM y luego agrupa volúmenes iguales. Esta herramienta proporciona ese flujo recomendado.
El volumen de dilución es demasiado pequeño (p. ej., 0,2 µL).
Es difícil pipetear volúmenes muy pequeños. Considera una dilución intermedia o ajusta el volumen final.
¿Puedo usar valores nM (o pM) de qPCR?
Sí. Usa el modo de entrada directa nM. Ten en cuenta que las definiciones de cuantificación pueden variar según el método.
¿Será exacta la concentración combinada?
Es una guía. Los errores de cuantificación y pipeteo y la variación de la longitud de los fragmentos pueden alterar el valor final.
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