कैसे उपयोग करें (3 चरण)
- एक उदाहरण चुनें या लाइब्रेरी एकाग्रता (एनजी/μL या एनएम) और टुकड़े की लंबाई (बीपी) दर्ज करें।
- तनुकरण नुस्खा (स्टॉक + पानी) देखने के लिए लक्ष्य एनएम और अंतिम मात्रा का चयन करें।
- एक पूलिंग विधि चुनें। फिर प्रति-लाइब्रेरी वॉल्यूम और पूल किए गए एनएम (गाइड) की समीक्षा करें।
nM में रूपांतरण लंबाई, MW कारकों और परिमाणीकरण विधि पर निर्भर करता है। परिणामों को मार्गदर्शक की तरह लें और अंतिम निर्णय के लिए अपना प्रोटोकॉल मानें।
इनपुट (लाइब्रेरी टेबल)
परिणाम (रूपांतरण, तनुकरण, पूलिंग)
| नाम | स्टॉक (एनएम) | तनुकरण: स्टॉक (µL) | तनुकरण: पानी (µL) | पूल की मात्रा (μL) |
|---|
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इसकी गणना कैसे की जाती है
- रूपांतरण (गाइड): nM = (ng/µL) × 1e6 / (लंबाई × MW_per_bp)
- तनुकरण: C1V1 = C2V2 (V_stock = (C_target/C_stock) × V_final)
- प्रत्यक्ष समान-दाढ़ पूलिंग: वॉल्यूम आवंटित करें ताकि C_i × V_i बराबर हो (कुल मात्रा दी गई)
रूपांतरण लंबाई, मेगावाट कारकों और परिमाणीकरण विधि पर निर्भर करता है। इन परिणामों को एक मार्गदर्शक के रूप में उपयोग करें.
सामान्य प्रश्न
ng/µL → nM रूपांतरण किसके लिए प्रयोग किया जाता है?
समान-दाढ़ pooling में अणु गणना के आधार पर लाइब्रेरियों को normalize करने के लिए इसका उपयोग करें।
मुझे टुकड़े की लंबाई (बीपी) कहां मिलेगी?
बायोएनालाइज़र/टेपस्टेशन रिपोर्ट से औसत आकार का उपयोग करें। एडॉप्टर समावेशन को रिपोर्ट परिभाषा के अनुरूप रखें।
समान-द्रव्यमान और समान-मोलर पूलिंग के बीच क्या अंतर है?
समान द्रव्यमान ng मान से मेल खाता है, जबकि समान दाढ़ अणु गणना (nM) से मेल खाता है। लंबाई अलग-अलग हो, तो समान द्रव्यमान अणुओं की संख्या बराबर नहीं करेगा।
सामान्यीकरण क्या है?
सभी लाइब्रेरियों को समान nM तक dilute करके normalize करें। फिर समान मात्राएँ pool करें। यह उपकरण सुझाया गया workflow दिखाता है.
तनुकरण की मात्रा बहुत छोटी है (जैसे, 0.2 µL).
बहुत छोटी मात्रा को पिपेट करना कठिन होता है। मध्यवर्ती तनुकरण या अंतिम मात्रा को समायोजित करने पर विचार करें।
क्या मैं qPCR से nM (या pM) मानों का उपयोग कर सकता हूँ?
हाँ. प्रत्यक्ष एनएम इनपुट मोड का उपयोग करें। ध्यान दें कि परिमाणीकरण परिभाषाएँ विधि के अनुसार भिन्न हो सकती हैं।
क्या एकत्रित सांद्रता सटीक होगी?
यह एक मार्गदर्शक है। मात्रा निर्धारण और पिपेटिंग त्रुटियां, तथा टुकड़े की लंबाई भिन्नता अंतिम मूल्य को बदल सकती है।
संबंधित उपकरण
टिप्पणियाँ
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