使用方法(3步)
- 選擇一個範例或輸入目標大小(基因組大小/總目標區域)。
- 輸入讀取計數 (PE/SE) 或總產量 (Gb)。
- 出現平均深度。如果需要,調整因子或使用逆計算。
這是一個估計。實際覆蓋率並不統一,並且隨重複、GC 偏差、設計和分析而變化。使用 QC 覆蓋率分佈進行驗證。
輸入
—
目標尺寸
WGS 使用基因組大小;外顯子組/面板使用總目標大小 (bp)。
範例:3.2 Gb(約人類 WGS)/50 Mb(約人類外顯子組)
輸入方式
因數 (0–1)
您可以保留預設值進行粗略估計。
—
選項
≥k× 是基於 Poisson 的參考,假設均勻隨機覆蓋。實際資料會有所不同(在高深度,可以使用正態近似)。
結果(平均深度)
平均深度(×)
—
目標尺寸
—
輸入方式
—
有效因子
—
逆(所需資料)
—
≥k×(指導)
—
中間計算(原始→可用→映射→目標→唯一)
| 步驟 | 基地(汽車單位) |
|---|
≥k×比例(指導)
| 閾值 | P(深度≥k) |
|---|
基於 Poisson 的參考,平均深度為 λ(由於覆蓋範圍不均勻,因此不確定)。
計算方法
- 根據讀取計數 (PE/SE) 或總產量 (Gb) 計算 raw_bases。
- 應用可用率、映射率、目標值和重複率(1 個重複)來估計獨特的目標鹼基。
- 平均深度 = unique_on_target_bases / target_size。
- ≥k× 可以顯示為基於 Poisson 的參考。
平均深度很有用,但均勻性是不同的。與覆蓋率分佈 QC 確認。
常見問題
30× WGS 需要多少次讀取?
它取決於目標大小、讀取長度和因素(映射率等)。根據您的條件使用逆計算。
達標率是多少?
落在目標區域的可用讀數的粗略部分(因試劑盒/條件而異)。
如果平均深度相同,那麼每個區域的深度是否相同?
不。平均值只是平均值,實際覆蓋範圍各不相同。以此作為指導。
≥k×比例準確嗎?
這是一個基於 Poisson 的參考,假設均勻隨機覆蓋。實際資料有所不同。
相關工具
- DNA/RNA 濃度 ↔ 摩爾 ↔ 拷貝數
用於文庫製備和輸入轉換。
- qPCR 標準曲線計算機
類似的定量工作流程(標準→曲線→反演)。
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