Come utilizzare (3 passaggi)
- Selezionare un esempio o incollare gli standard (concentrazione e segnale).
- Scegli 4PL/5PL, ponderazione e altre impostazioni.
- Vengono visualizzate la curva e le concentrazioni sconosciute (l'estrapolazione è contrassegnata).
Questo è un modello. L'estrapolazione al di fuori dell'intervallo standard può essere imprecisa. Usa la sottrazione degli spazi solo quando necessario.
Hai bisogno di aiuto con la gestione dei grezzi, 4PL vs 5PL o l'estrapolazione?
Utilizzare questo calcolatore per l'adattamento ELISA effettivo, le prove di ponderazione, i controlli di recupero e le stime di concentrazione sconosciuta. Inizia con 4PL, ispeziona i residui e il recupero, quindi prova 5PL solo quando la curva standard mostra una chiara asimmetria che il modello più semplice non può spiegare.
Apri il guida alle curve standard del test quando hai bisogno del ragionamento alla base del trattamento del bianco, della scelta del modello, dei controlli della gamma e della formulazione del rapporto.
Dati (standard, incognite, impostazioni)
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Opzioni di visualizzazione
Colonne minime: concentration e signal. Più righe con la stessa concentrazione vengono trattate come repliche.
Colonne minime: sample e signal. Se fattore_diluizione è vuoto, viene considerato come 1.
Risultati (curva e concentrazioni)
R² e AIC sono guide. Controllare anche i residui e se i valori sono estrapolati.
Curva standard
Trama residua (facoltativa)
Parametri (A, B, C, D, G)
| param | valore | IC 95% (circa) |
|---|
Guida: A=Basso (bassa concentrazione), D=Alto (alto), C=EC50 (punto medio), B=Pendenza collinare, G=asimmetria (solo 5PL). Internamente calcoliamo (x/C)^B come exp(B·ln(x/C)). Log10 sull'asse x serve per la leggibilità.
QC (calcolo retrospettivo/recupero)
| etichetta | conc_nominale | segnale_media | conc_hat | recupero |
|---|
Incognite (y → concentrazione)
| campione | segnale_media | DF | conc_misurato | conc_originale | bandiera |
|---|
Come viene calcolato
- Adatta una curva logistica 4PL/5PL con i minimi quadrati non lineari.
- Le concentrazioni sconosciute vengono calcolate invertendo la curva adattata.
- La ponderazione (1/anno, 1/anno², ecc.) può aiutare a gestire la varianza tra gli intervalli di concentrazione.
- Gli standard e i residui retrocalcolati aiutano a rivelare errori prima di riportare concentrazioni sconosciute.
I valori sono guide. Controlla anche i valori anomali, gli intervalli standard, i fattori di diluizione e se ciascuna incognita rientra nell'intervallo calibrato.
Domande frequenti
Dovrei usare 4PL o 5PL?
4PL è spesso sufficiente. Utilizzare 5PL se è necessaria l'asimmetria (confrontare con AIC, ecc.).
Ho bisogno di una ponderazione (1/anno, 1/anno²)?
Non richiesto. Inizia senza ponderazione e provalo se compaiono errori nell'intervallo.
Come devo gestire la concentrazione 0 (vuoto)?
Per impostazione predefinita, gli spazi vuoti sono esclusi dall'adattamento (funziona bene con log x). Utilizzare la sottrazione degli spazi solo se necessario.
Un valore sconosciuto non rientra nell'intervallo standard.
Verrà mostrato come estrapolato. La precisione diminuisce, quindi diluire e misurare nuovamente entro l'intervallo.
Come faccio a sapere se una concentrazione sconosciuta è segnalabile?
Preferire valori compresi nell'intervallo standard con recupero accettabile e nessun flag di estrapolazione. Se una sostanza sconosciuta è al di fuori dell'intervallo calibrato, diluire o analizzare nuovamente il campione in modo che il segnale rientri negli standard.
Dovrei modificare la ponderazione prima di cambiare il modello?
Di solito sì. Innanzitutto confronta l'assenza di ponderazione con un'opzione di ponderazione ragionevole, quindi esamina i residui. Passare da 4PL a 5PL solo quando permane l'asimmetria e il parametro aggiuntivo migliora l'interpretazione.
Interpretazione e passi successivi
Mantieni questa pagina incentrata sull'adattamento ELISA stesso. Passare alla guida quando la domanda è se la sottrazione dei bianchi appartiene al flusso di lavoro, se 5PL migliora davvero l'interpretazione o come spiegare le incognite estrapolate in un report.
- Guida alle curve standard del testLeggi di seguito per informazioni sulla gestione del bianco, sulla scelta 4PL o 5PL, sui controlli di estrapolazione e sulla formulazione del report pronto per i flussi di lavoro del test.
- Calcolatore della curva standard delle proteine (BCA / Bradford)Passare qui quando il flusso di lavoro è una curva standard di analisi proteica anziché una piastra ELISA con adattamento logistico.
- Calcolatore di concentrazione e purezza A260Utilizzarlo prima del test quando la concentrazione o la purezza del campione necessita ancora di un controllo rapido.
- Calcolatore di regressione lineareAprire una pagina di regressione più semplice quando si desidera verificare il comportamento di adattamento e residuo al di fuori dell'intero flusso di lavoro ELISA.
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