Pencocokan kurva standar ELISA (4PL/5PL)

Cara menggunakan (3 langkah)

Pilih contoh atau tempel standar (konsentrasi dan sinyal).
Pilih 4PL/5PL, bobot, dan pengaturan lainnya.
Kurva dan konsentrasi yang tidak diketahui muncul (ekstrapolasi ditandai).

Ini adalah sebuah model. Ekstrapolasi di luar kisaran standar bisa jadi tidak akurat. Gunakan pengurangan kosong hanya bila diperlukan.

Masih ragu tentang blanko, pembobotan, atau pilihan 4PL vs 5PL?

Panduan kurva standar assay membantu memutuskan kapan blanko perlu dikoreksi, bagaimana membaca ekstrapolasi, dan kapan 5PL benar-benar memberi nilai tambah dibanding 4PL yang lebih sederhana.

Panduan kurva standar assay Assay protein Hub biologi

Input (standar, tidak diketahui, pengaturan)

Contoh (yang telah ditetapkan)

—

Model Pembobotan sumbu x log10 (disarankan) Kosong (0 konsentrasi) Satuan konsentrasi Satuan khusus

Opsi tampilan

Rata-rata ulangan (konsentrasi/sampel yang sama)

Tampilkan plot residu

Tampilkan perhitungan kembali (pemulihan)

Tampilkan 95% CI untuk parameter (perkiraan)

Standar (tempel)

Kolom minimal: concentration dan signal. Beberapa baris dengan konsentrasi yang sama dianggap sebagai ulangan.

Tidak diketahui (opsional)

Kolom minimal: sample dan signal. Jika dilution_factor kosong, maka dianggap 1.

Komputasi otomatis (perbarui perubahan input)

Hasil (kurva & konsentrasi)

Model

—

Pembobotan

—

Titik yang digunakan (konsen>0)

—

R² (panduan)

—

RMSE (panduan)

—

AIC (panduan)

—

Perbandingan AIC (ref)

—

Rata-rata blanko

—

R² dan AIC adalah panduan. Periksa juga residu dan apakah nilainya diekstrapolasi.

Kurva standar

Konsentrasi yang dikecualikan

—

Plot residu (opsional)

Parameter (A, B, C, D, G)

param	nilai	95% CI (perkiraan)

Panduan: A=Bawah (konsentrasi rendah), D=Atas (tinggi), C=EC50 (titik tengah), B=Hill kemiringan, G=asimetri (hanya 5PL). Secara internal kami menghitung (x/C)^B sebagai exp(B·ln(x/C)). Log10 pada sumbu x adalah untuk keterbacaan.

QC (perhitungan kembali / pemulihan)

label	conc_nominal	rata-rata sinyal	conc_hat	pemulihan

Tidak diketahui (y → konsentrasi)

sampel	rata-rata sinyal	DF	konsentrasi terukur	konsentrasi asal	flag

Bagaimana cara menghitungnya

Cocokkan kurva logistik 4PL/5PL dengan kuadrat terkecil nonlinier.
Konsentrasi sampel tidak diketahui dihitung dengan membalikkan kurva hasil pencocokan.
Pembobotan (1/y, 1/y², dll.) dapat membantu menangani varians antar rentang konsentrasi.

Nilai adalah panduan. Periksa juga outlier, rentang standar, dan kondisi pengenceran.

Pertanyaan umum

Haruskah saya menggunakan 4PL atau 5PL?

4PL seringkali sudah cukup. Gunakan 5PL jika diperlukan asimetri (bandingkan dengan AIC, dll.).

Apakah saya memerlukan pembobotan (1/y, 1/y²)?

Tidak diperlukan. Mulailah tanpa memberi bobot dan cobalah jika bias muncul di seluruh rentang.

Bagaimana cara menangani konsentrasi 0 (kosong)?

Secara default, blanko dikecualikan dari pencocokan (berfungsi baik dengan log x). Gunakan pengurangan blanko hanya jika diperlukan.

Nilai yang tidak diketahui berada di luar kisaran standar.

Ini akan ditampilkan sebagai ekstrapolasi. Akurasi menurun, jadi encerkan dan ukur kembali dalam jangkauan.

Panduan kurva standar assay
Baca lagi di sini logika blanko, perbandingan 4PL/5PL, dan seberapa hati-hati hasil ekstrapolasi harus diperlakukan.
Kalkulator kurva standar protein (BCA / Bradford)
Bandingkan dengan alur assay protein saat Anda perlu kembali ke kurva yang lebih sempit dan kurang sigmoidal.
Kalkulator konsentrasi & kemurnian A260
Periksa kualitas sampel sebelum menyimpulkan bahwa masalah utama ada pada model ELISA.
Kalkulator regresi linear
Tinjau slope, intercept, dan residu dalam halaman yang lebih sederhana sebelum memakai pencocokan logistik penuh.

Komentar

Tinggalkan pertanyaan, permintaan, atau koreksi di komentar.