使用方法(3步)
- 选择示例或粘贴标准(浓度和信号)。
- 选择 4PL/5PL、权重和其他设置。
- 出现曲线和未知浓度(标记了外推法)。
这是一个模型。标准范围之外的外推可能不准确。仅在需要时才使用空白减法。
输入(标准、未知数、设置)
—
显示选项
最小列数: concentration 和 signal。具有相同浓度的多行被视为重复。
最小列数: sample 和 signal。如果dilution_factor为空,则按1处理。
结果(曲线和浓度)
型号
—
加权
—
使用的点数(浓度>0)
—
R²(指南)
—
RMSE(指南)
—
AIC(指南)
—
AIC 比较(参考)
—
空白平均值
—
R² 和 AIC 是指南。还要检查残差以及值是否是外推的。
标准曲线
排除浓度
—
残差图(可选)
参数(A、B、C、D、G)
| 参数 | 值 | 95% CI(大约) |
|---|
指南:A=底部(低浓度)、D=顶部(高)、C=EC50(中点)、B=Hill 斜率、G=不对称(仅限 5PL)。我们在内部计算 (x/C)^B 作为 exp(B·ln(x/C))。 x 轴上的 Log10 是为了便于阅读。
QC(反算/回收)
| 标签 | 标称浓度 | 信号平均值 | 浓缩帽 | 恢复 |
|---|
未知数(y → 浓度)
| 样品 | 信号平均值 | DF | 测量浓度 | conc_original | 旗帜 |
|---|
计算方法
- 使用非线性最小二乘法拟合 4PL/5PL Logistic 曲线。
- 通过反转拟合曲线来计算未知浓度。
- 加权(1/y、1/y² 等)可以帮助处理浓度范围内的差异。
价值观是指导。还要检查异常值、标准范围和稀释条件。
常见问题
我应该使用 4PL 还是 5PL?
4PL 通常就足够了。如果需要不对称性,请使用5PL(与AIC等相比)。
我需要加权(1/y,1/y²)吗?
不需要。开始时不要加权,如果整个范围内出现偏差,请尝试使用。
我应该如何处理浓度 0(空白)?
默认情况下,空白被排除在拟合之外(与 log x 配合良好)。仅在需要时才使用空白减法。
未知值超出标准范围。
它将显示为推断值。精度会下降,因此请在范围内稀释并重新测量。
相关工具
- qPCR 标准曲线计算器
类似的定量工作流程(标准→曲线→未知)。
- A260浓度和纯度
有助于样品制备和质量控制。
- DNA/RNA 浓度 ↔ 摩尔 ↔ 拷贝数
另一种核酸定量工具。
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