कैसे उपयोग करें (3 चरण)
- एक उदाहरण चुनें या बैकबोन और इंसर्ट के लिए टुकड़े की लंबाई (बीपी) और एकाग्रता (एनजी/μL) दर्ज करें।
- दाढ़ अनुपात (उदाहरण के लिए, 2× सम्मिलित करें) और रीढ़ की हड्डी की मात्रा (pmol या ng) चुनें।
- आवश्यक द्रव्यमान (एनजी) और आयतन (μL), साथ ही एक नुस्खा (मास्टर मिश्रण/अभिकर्मक और शेष पानी), दिखाई देगा।
यह एक मात्रा कैलकुलेटर है. अनुशंसित स्थितियाँ किट और प्रोटोकॉल के अनुसार अलग-अलग होती हैं, इसलिए अपने प्रोटोकॉल का पालन करें। Golden Gate अभिकर्मक प्रीसेट केवल गणना के लिए उदाहरण हैं।
इनपुट (खंड तालिका)
परिणाम
शेष पानी (µL)
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कुल DNA आयतन (μL)
—
कुल DNA द्रव्यमान (एनजी)
—
2× मास्टर मिक्स आयतन (μL)
—
| टुकड़ा | भूमिका | लंबाई (बीपी) | लक्ष्य (pmol) | मास (एनजी) | आयतन (μL) | नोट |
|---|
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यह उपकरण केवल राशियों की गणना करता है. यह सफलता की गारंटी नहीं देता.
इसकी गणना कैसे की जाती है
- एक dsDNA सन्निकटन के रूप में, pmol = (द्रव्यमान_एनजी × 1000) / (बीपी × 660).
- बैकबोन राशि निर्धारित करें (Gibson के लिए pmol, Golden Gate के लिए ng) और बैकबोन pmol की गणना करें।
- प्रत्येक सम्मिलित लक्ष्य है इन्सर्ट_टारगेट_पमोल = बैकबोन_पमोल × अनुपात, फिर द्रव्यमान (एनजी) में परिवर्तित हो गया।
- यदि सांद्रता (ng/µL) ज्ञात हो, आयतन = द्रव्यमान / सांद्र आयतन (μL) देता है।
- शेष पानी की गणना कुल प्रतिक्रिया मात्रा घटाकर मास्टर मिश्रण/अभिकर्मकों और DNA मात्रा से की जाती है।
मूल्य मार्गदर्शक होते हैं। अंतिम स्थितियों के लिए अपने किट/प्रोटोकॉल का पालन करें।
सामान्य प्रश्न
Gibson और Golden Gate के बीच क्या अंतर है?
दोनों DNA टुकड़े इकट्ठा करते हैं, लेकिन प्रतिक्रिया तंत्र और एंजाइम भिन्न होते हैं। यह टूल गणना करता है कि कितना DNA मिलाना है।
दाढ़ अनुपात का उपयोग क्यों करें?
अलग-अलग लंबाई के टुकड़ों में एक ही द्रव्यमान पर अलग-अलग अणु संख्या होती है। मोलर अनुपात अणुओं की संख्या को सुसंगत रखता है।
आमतौर पर कौन से अनुपात का उपयोग किया जाता है?
सामान्य नियम के रूप में, आवेषण अक्सर 2× या 3× रीढ़ की हड्डी के होते हैं। यह असेंबली पर निर्भर करता है और इसका परीक्षण किया जाना चाहिए।
क्या मैं इसे एकाग्रता मूल्यों के बिना उपयोग कर सकता हूँ?
हाँ. आप अभी भी आवश्यक द्रव्यमान (एनजी) की गणना कर सकते हैं। वॉल्यूम (μL) केवल तभी दिखाए जाते हैं जब सांद्रता प्रदान की जाती है।
मेरे वॉल्यूम बेहद छोटे हैं (उदाहरण के लिए, 0.1 μL)।
बहुत छोटी मात्राएँ त्रुटि-प्रवण होती हैं। मध्यवर्ती तनुकरण पर विचार करें या रीढ़ की हड्डी की मात्रा और प्रतिक्रिया की मात्रा को समायोजित करें।
क्या मैं Golden Gate अभिकर्मक प्रीसेट का उपयोग यथावत कर सकता हूँ?
अभिकर्मक की मात्रा किट और प्रोटोकॉल पर निर्भर करती है। प्रीसेट केवल गणना के लिए उदाहरण हैं; अपने प्रोटोकॉल का पालन करें.
क्या ये राशियाँ सफलता की गारंटी देंगी?
नहीं, यह उपकरण केवल मात्राओं की गणना करता है। सफलता डिज़ाइन, DNA गुणवत्ता और प्रतिक्रिया स्थितियों पर निर्भर करती है।