Guía de curvas estándar de ensayos

Cuándo esta guía ayuda más que la calculadora sola

Si ya sabes qué ajuste vas a usar y solo te falta la concentración, abre la calculadora. Quédate aquí cuando la decisión difícil sea si el blanco debe restarse, si una cuadrática merece la pena, si un 5PL mejora de verdad la lectura o cómo justificar una extrapolación.

Dónde se separan proteína y ELISA

Los ensayos de proteínas como BCA o Bradford suelen funcionar como curvas estándar de rango relativamente estrecho, así que la decisión práctica gira alrededor de lineal frente a cuadrática y de cómo tratar el blanco. En ELISA es más frecuente una respuesta sigmoidal, por lo que la discusión real pasa por 4PL frente a 5PL, la ponderación y el comportamiento de las mesetas.

• La calculadora de proteínas sirve para estándares BCA/Bradford, incógnitas y concentraciones con dilución.
• La calculadora ELISA sirve para 4PL/5PL, ponderación, back-calculation y concentración de muestras.
• Esta guía sirve para decidir qué significan esos resultados antes de darlos por definitivos.

Blanco y línea base

Restar el blanco no mejora una curva por sí solo. Solo ayuda cuando ese blanco representa el mismo fondo que arrastran estándares y muestras. Si al restarlo cambia demasiado la conclusión, puede que no hayas limpiado el ajuste: puede que estés viendo un problema de preparación o de diseño experimental.

En proteína conviene mirar si el estándar de concentración 0 se parece de verdad a la matriz de las muestras. En ELISA, primero decide si el punto 0 entra al ajuste, se resta y se excluye, o queda fuera con eje logarítmico.

Cómo elegir el modelo

El modelo debe seguir el comportamiento del ensayo, no el valor que se vea más bonito. En proteína suelen bastar lineal o cuadrática. En ELISA, 4PL o 5PL son más defendibles cuando la respuesta es claramente sigmoidal.

1. Empieza por el modelo más simple compatible con el ensayo.
2. Revisa residuales, no solo una métrica resumen.
3. Sube al modelo más flexible solo si corrige una desviación real.

Rango útil, atípicos y extrapolación

Lo ideal es que la muestra desconocida quede dentro del rango cubierto por los estándares. Si cae fuera, el valor es una extrapolación y debe tratarse como advertencia, no como una cuantificación estable. La decisión correcta suele ser rediluir o repetir la medida dentro del rango.

Un punto estándar que se desvía mucho también merece atención. Si lo excluyes, deja claro por qué y si la conclusión cambia al volver a incluirlo.

Qué conviene dejar por escrito

Para que otra persona pueda reproducir el análisis, deja el tipo de ensayo, el rango estándar, el modelo elegido, la ponderación, el manejo del blanco, los puntos excluidos, los factores de dilución y si hubo extrapolación.

Páginas recomendadas a continuación

• Calculadora de curva estándar de proteínas (BCA / Bradford)
  Ejecuta el ajuste real de BCA o Bradford, compara lineal y cuadrática y estima concentraciones desconocidas.
• ELISA ajustador de curvas estándar (4PL/5PL)
  Abre esta página para 4PL/5PL, ponderación, recuperación y concentración de muestras ELISA.
• Calculadora de concentración y pureza del A260 (A260/280, A260/230)
  Úsala antes del ensayo cuando todavía necesitas revisar concentración o pureza de la muestra.
• Calculadora de regresión lineal
  Sirve para ver una regresión más simple y revisar pendiente, intercepto y residuales fuera del flujo completo del ensayo.
• Biología
  Vuelve al hub cuando necesites el flujo más amplio de qPCR, biología molecular y trabajo de laboratorio.

Preguntas frecuentes