测定标准曲线指南

什么时候先看指南，而不是直接打开计算器

如果你已经知道要跑哪种模型，只差把未知浓度算出来，就直接去计算器。反过来，如果难点在于空白是否该扣、曲线形状是否合理、未知值是不是已经外推、或者报告里应该交代哪些决策，这页会更有帮助。

蛋白测定和 ELISA 的分岔点

BCA 和 Bradford 往往是较窄量程的标准曲线，所以常见判断集中在线性还是二次，以及空白处理是否一致。ELISA 更容易出现 S 形响应，实际争议通常会转到 4PL 还是 5PL、是否需要加权，以及上下平台是否可信。

• 做 BCA / Bradford 时，优先打开蛋白质标准曲线计算器。
• 做 4PL / 5PL、回算和恢复检查时，优先打开 ELISA 标准曲线拟合器。
• 在结果定稿前，用这页回看这些拟合输出到底意味着什么。

空白扣除与基线判断

空白扣除不是自动加分项。只有在空白确实代表标准品和未知样品共享的背景信号时，才值得统一扣除。如果一扣空白，结论就大幅变化，往往说明先该检查实验设置，而不是急着接受“更好看”的曲线。

蛋白测定里，要先确认零浓度标准是否真的对应未知样品的基质。ELISA 里，则要决定 0 浓度行是应该留在图上但不参与拟合、先扣空白再排除，还是在 log-x 设定下以极小值处理。

模型怎么选

模型应该跟着实验行为走，而不是只追求更高的分数。蛋白测定在中等量程下常常足以用线性或二次；ELISA 在覆盖宽量程且明显呈 S 形时，更适合比较 4PL 和 5PL。

1. 先用与测定类型最匹配的简单模型起步。
2. 看残差模式，不要只看一个总评分。
3. 只有在复杂模型真正修复了系统性偏差时，才值得升级。

量程、离群点与外推

未知样品最好落在标准点夹住的范围内。一旦超出范围，结果就应被视为外推警告。更稳妥的做法通常是重新稀释、重新测量，或者收紧标准范围，而不是直接接受第一次估计值。

单个可疑点也比表面上的高 R² 更重要。若剔除了离群点，请同时记录剔除理由，以及保留该点时结论是否会改变。

报告里至少要交代什么

可复现的测定记录至少应写明：测定类型、标准范围、所选模型、是否加权、空白处理方式、是否剔除点、样品稀释倍数，以及是否存在外推。只有最终浓度数字，通常不足以支持结果复查。

接下来建议打开的页面

• 蛋白质标准曲线计算器（BCA/Bradford）
  实际运行 BCA 或 Bradford 的标准曲线拟合，比较线性与二次，并输出未知样品浓度。
• ELISA 标准曲线拟合器 (4PL/5PL)
  需要 4PL/5PL、加权、回算与恢复检查时，从这里继续。
• A260浓度和纯度计算器
  如果样品质量和浓度本身还不确定，先在这里检查，再进入测定曲线流程。
• 线性回归计算器
  只想单独看斜率、截距和残差时，用这个更轻量的页面复查。
• 生物学
  回到生物学中心，把 A260、测定曲线和回归复查放回完整实验流程中。

常见问题