使用方法(3步)
- 选择一个示例或输入向量长度 (bp) 和插入长度 (bp)。
- 输入目标摩尔比(例如 1:3)和矢量质量 (ng)。
- 显示所需的插入物质量 (ng) 和体积 (μL)(如果提供浓度)。
这是一个数量计算器。最佳比率取决于末端类型和条件;遵循您的协议。
输入(载体/插入片段)
结果
所需插入片段用量
— ng
所需插入片段体积(已提供浓度时)
— µL
所需载体体积(已提供浓度时)
— µL
摩尔量(参考)
—
目标比例(插入片段/载体)
—
DNA 小计
— ng / — µL
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比较常用比例(可选)
| 比例(载体:插入片段) | 插入片段用量(ng) | 插入片段体积(µL) |
|---|
此工具仅计算用量,不保证实验成功。
计算方法
- 作为 dsDNA 近似值, pmol =(质量ng×1000)/(bp×660).
- 根据矢量质量和长度计算矢量 pmol。
- 代入目标 pmol = 矢量 pmol × 目标比率,然后转换回质量 (ng)。
- 如果浓度已知,则体积=质量/浓度。
价值观是指导。请遵循您的最终条件协议。
常见问题
为什么使用摩尔比?
不同长度的片段在相同质量下具有不同的分子数。摩尔比使分子计数保持一致。
常用的比例有哪些?
载体:插入片段比率如 1:3 或 1:5 是常见的起点。最佳比率取决于目的和条件。
我应该使用哪个向量长度?
使用用于连接的线性化载体片段的实际长度,通常是完整的质粒长度。
我不知道插入浓度。
您仍然可以计算所需的质量 (ng)。仅当提供浓度时才显示体积 (μL)。
我的体积非常小(例如 0.1 µL)。
非常小的体积很容易出错。考虑中间稀释或调整载体质量和反应体积。
这些金额能保证成功吗?
不可以。该工具仅计算金额。成功取决于末端类型、反应条件和 DNA 质量。