Cómo utilizar (3 pasos)
- Elija un ejemplo o ingrese la concentración de la biblioteca (ng/μL o nM) y la longitud del fragmento (pb).
- Seleccione un nM objetivo y un volumen final para ver una receta de dilución (caldo + agua).
- Elija un método de agrupación y revise los volúmenes por biblioteca y los nM agrupados (guía).
La conversión a nM depende de la longitud, los factores MW y el método de cuantificación. Trate los resultados como una guía y siga su protocolo para las decisiones finales.
Entradas (tabla de biblioteca)
Resultados (conversión, dilución, combinación)
| Nombre | Existencias (nM) | Dilución: stock (μL) | Dilución: agua (μL) | Volumen de la piscina (μL) |
|---|
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como se calcula
- Conversión (guía): nM = (ng/μL) × 1e6 / (longitud × MW_per_bp)
- Dilución: C1V1 = C2V2 (V_stock = (C_objetivo/C_stock) × V_final)
- Agrupación directa de iguales molares: asigne volúmenes de modo que C_i × V_i sea igual (dado el volumen total)
La conversión depende de la longitud, los factores MW y el método de cuantificación. Utilice estos resultados como guía.
Preguntas frecuentes
¿Para qué se utiliza la conversión ng/μL → nM?
Úselo para normalizar bibliotecas mediante recuentos de moléculas para agrupaciones de igual molar (diferentes de igual masa).
¿De dónde obtengo la longitud del fragmento (pb)?
Utilice el tamaño promedio de un informe de Bioanalyzer/TapeStation. Mantenga la inclusión del adaptador coherente con la definición del informe.
¿Cuál es la diferencia entre agrupación de igual masa y de igual molar?
Una masa igual coincide con los valores de ng, mientras que un molar igual coincide con los recuentos de moléculas (nM). Si las longitudes difieren, una masa igual no igualará el número de moléculas.
¿Qué es la normalización?
Normalice diluyendo todas las bibliotecas al mismo nM y luego agrupe volúmenes iguales. Esta herramienta proporciona ese flujo recomendado.
El volumen de dilución es demasiado pequeño (p. ej., 0,2 µL).
Es difícil pipetear volúmenes muy pequeños. Considere una dilución intermedia o ajustar el volumen final.
¿Puedo usar valores nM (o pM) de qPCR?
Sí. Utilice el modo de entrada directa nM. Tenga en cuenta que las definiciones de cuantificación pueden diferir según el método.
¿Será exacta la concentración combinada?
Es una guía. Los errores de cuantificación y pipeteo y la variación de la longitud de los fragmentos pueden alterar el valor final.
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