Como usar (3 passos)
- Escolha um exemplo ou insira o volume de reação e a contagem de reações (ou placa de 96/384 poços).
- Definir excesso (por exemplo, 10%) e componentes (mistura 2×, primers, etc.).
- São mostrados volumes por reação, totais com excesso e um protocolo de pipetagem.
Esta ferramenta calcula apenas volumes. Otimize as condições separadamente.
Entradas
Resultados
Tabela de componentes
| Componente | Por reação (µL) | Total (µL) | Notas |
|---|
A tabela rola horizontalmente.
“Separado” indica componentes normalmente adicionados fora do master mix (por exemplo, modelo).
Protocolo (pronto para cópia)
—
Compartilhar URL / Exportar
URLs de compartilhamento incluem entradas (incluindo componentes) e podem ser longos.
Como é calculado
- Da concentração ao volume: Usando C1V1=C2V2, V1 = (C_final / C_estoque) × Vtotal.
- Concentração de dobras (2×/5×): V = (final_x / stock_x) × Vtotal (geralmente final = 1×).
- Excedente: A porcentagem é arredondada (teto), preparado = teto (poços × (1 + pct/100)).
- Água (preencher): Água = Vtotal − ΣV(componente). Negativo significa um erro.
- Totais: Componentes incluídos no master mix usam contagem preparada; componentes separados usam contagem de poços (alternável).
Esta ferramenta calcula apenas volumes; não garante sucesso experimental.
FAQ
O que é uma mixagem mestre?
Uma mistura mestre é uma mistura de reagentes comum preparada para múltiplas reações. Reduz as etapas de pipetagem e a variabilidade.
Quanto excedente devo adicionar?
Um guia típico é de 5–10% ou +1 reação. Ajuste com base na pipetagem e na contagem de reações.
Como faço para inserir um master mix 2× (ou 5×)?
Insira-o como uma concentração dobrada. Para que uma mistura 2× atinja 1× final, o volume é cerca de metade do volume da reação (calculado automaticamente).
O modelo deve ser incluído no master mix?
Muitas vezes, o modelo é adicionado separadamente para reduzir o risco de contaminação e o viés de amostra para amostra. O padrão desta ferramenta é adição separada (alternável).
Por que o volume de água é negativo?
Os totais dos componentes excedem o volume de reação. Aumente o volume de reação ou reduza os volumes dos componentes (especialmente o modelo).
Obtive um volume muito pequeno (por exemplo, 0,1 μL).
Tais volumes são difíceis de pipetar. Considere diluição intermediária ou ajuste do volume de reação.
Posso usar isso para qPCR?
Sim. Insira uma mistura 2× qPCR e concentrações de primer para calcular os volumes totais.
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