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Biologia molecular Clonagem

Calculadora de razão molar de ligadura (vetor:inserir)

Calcule a massa de inserção necessária (ng) a partir da massa e comprimento do vetor, além de uma razão molar alvo (por exemplo, 1:3). Se a concentração for conhecida, o volume necessário (µL) também é mostrado.

Todos os cálculos são executados no seu navegador. Nenhum dado é enviado.

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Como usar (3 passos)

  1. Selecione um exemplo ou insira o comprimento do vetor (bp) e insira o comprimento (bp).
  2. Insira a razão molar alvo (por exemplo, 1:3) e a massa vetorial (ng).
  3. A massa necessária do inserto (ng) e o volume (µL) são mostrados (se a concentração for fornecida).

Esta é uma calculadora de quantidade. As proporções ideais dependem do tipo e das condições finais; siga seu protocolo.

Entradas (vetor/inserção)

—

Escolha como definir o valor do vetor.
Avançado

Resultados

Inserir massa (ng)
—
Inserir volume (µL)
—
Volume vetorial (µL)
—
Massa total DNA (ng)
—
Volume total de DNA (µL)
—
DNA Comprimento (bp) Massa (ng) Concentração (ng/µL) Volume (µL) pmol (guia)
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Esta ferramenta calcula apenas valores. Não garante sucesso.

Como é calculado

  1. Como uma aproximação do dsDNA, pmol = (massa_ng × 1000) / (pb × 660).
  2. Calcule o vetor pmol a partir da massa e comprimento do vetor.
  3. Insira pmol alvo = vetor pmol × razão alvo e, em seguida, converta novamente para massa (ng).
  4. Se a concentração for conhecida, volume = massa/concentração.

Os valores são guias. Siga seu protocolo para as condições finais.

FAQ

Por que usar razões molares?
Fragmentos de comprimentos diferentes têm contagens de moléculas diferentes na mesma massa. As proporções molares mantêm a contagem de moléculas consistente.
Quais proporções são comumente usadas?
Proporções vetor:inserção como 1:3 ou 1:5 são pontos de partida comuns. As proporções ideais dependem dos fins e das condições.
Qual comprimento de vetor devo usar?
Use o comprimento real do fragmento do vetor linearizado usado para ligação, geralmente o comprimento total do plasmídeo.
Não sei a concentração do inserto.
Você ainda pode calcular a massa necessária (ng). O volume (µL) é mostrado apenas quando a concentração é fornecida.
Meus volumes são extremamente pequenos (por exemplo, 0,1 μL).
Volumes muito pequenos são propensos a erros. Considere a diluição intermediária ou ajuste a massa do vetor e o volume da reação.
Esses valores garantirão o sucesso?
Não. Esta ferramenta calcula apenas valores. O sucesso depende do tipo final, das condições de reação e da qualidade DNA.