Comment utiliser (3 étapes)
- Choisissez un exemple ou entrez la concentration de la bibliothèque (ng/µL ou nM) et la longueur du fragment (pb).
- Sélectionnez un nM cible et un volume final pour voir une recette de dilution (stock + eau).
- Choisissez une méthode de regroupement et examinez les volumes par bibliothèque et les nM regroupés (guide).
La conversion en nM dépend de la longueur, des facteurs MW et de la méthode de quantification. Considérez les résultats comme un guide et suivez votre protocole pour les décisions finales.
Entrées (table de bibliothèque)
Résultats (conversion, dilution, pooling)
| Nom | Stock (nm) | Dilution : réserve (µL) | Dilution : eau (µL) | Volume de la piscine (µL) |
|---|
—
Comment c'est calculé
- Conversion (guide) : nM = (ng/µL) × 1e6 / (longueur × MW_per_bp)
- Dilution : C1V1 = C2V2 (V_stock = (C_target/C_stock) × V_final)
- Regroupement direct équimolaire : allouez les volumes de manière à ce que C_i × V_i soit égal (étant donné le volume total)
La conversion dépend de la longueur, des facteurs MW et de la méthode de quantification. Utilisez ces résultats comme guide.
FAQ
A quoi sert la conversion ng/µL → nM ?
Utilisez-le pour normaliser les bibliothèques par nombre de molécules pour un regroupement équimolaire (différent d'une masse égale).
Où puis-je obtenir la longueur des fragments (pb) ?
Utilisez la taille moyenne d’un rapport Bioanalyzer/TapeStation. Gardez l’inclusion de l’adaptateur cohérente avec la définition du rapport.
Quelle est la différence entre la mise en commun de masse égale et la mise en commun de molaire égale ?
Une masse égale correspond aux valeurs ng, tandis qu'une molaire égale correspond au nombre de molécules (nM). Si les longueurs diffèrent, une masse égale n’égalisera pas le nombre de molécules.
Qu’est-ce que la normalisation ?
Normalisez en diluant toutes les bibliothèques au même nM, puis regroupez des volumes égaux. Cet outil fournit le flux recommandé.
Le volume de dilution est trop petit (par exemple 0,2 µL).
Les très petits volumes sont difficiles à pipeter. Envisager une dilution intermédiaire ou un ajustement du volume final.
Puis-je utiliser les valeurs nM (ou pM) de qPCR ?
Oui. Utilisez le mode de saisie directe nM. Notez que les définitions de quantification peuvent différer selon la méthode.
La concentration mutualisée sera-t-elle exacte ?
C'est un guide. Les erreurs de quantification et de pipetage ainsi que la variation de la longueur des fragments peuvent modifier la valeur finale.
Outils associés
Commentaires
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