使い方（3ステップ）
- 例題を選ぶか、プライマー配列（Forward/Reverse）を入力します。
- 必要なら、計算方法やNa+、プライマー濃度などを設定します。
- Tmと、アニーリング温度の目安（Ta）が表示されます。
TmとTaは目安です。実際の最適条件は、試薬・装置・テンプレ品質などで変わります。温度勾配PCRなどで最終調整してください。
入力（プライマー配列）
結果（Tm・Taの目安）
使用した方法
—
| Primer | Tm | 長さ | GC% |
|---|---|---|---|
| Forward | — | — | — |
| Reverse | — | — | — |
ΔTm
—
Ta（目安）
—
探索範囲（Ta ± 3℃）
—
方法別の比較（参考）
| Primer | 最近傍法 | 塩補正 | Wallace |
|---|
※ IUPAC塩基（N/R/Yなど）を含む場合、最近傍法は不適用です。
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計算の流れ（How it’s calculated）
- おすすめ（最近傍法）：二塩基ステップごとの熱力学パラメータ（ΔH/ΔS）を合計し、Na+補正とプライマー濃度を考慮してTmを推定します。
- 簡易（塩補正あり）：GC%・長さ・Na+から、塩濃度の影響を入れた概算Tmを計算します。
- 超簡易（Wallace）：A/T と G/C の数から概算します（主に短めのオリゴ向け）。
- Ta（目安）：低い方のTm − オフセット（既定3℃）として表示し、参考として Ta ± 3℃ も出します。
IUPAC塩基（N/R/Yなど）を含む場合、最近傍法は不適用になるため、簡易法で表示します。
よくある質問（FAQ）
Tm（融解温度）とは何ですか？
DNA二本鎖が半分ほど解離するときの温度の目安です。長さ・GC%・塩濃度などで変わります。
アニーリング温度はどう決めればいいですか？
このツールでは目安としてTa（低い方のTm − オフセット）を表示します。最適条件は温度勾配PCRなどで最終調整してください。
計算式が複数あるのはなぜ？
前提や目的が異なるためです。最近傍法はより詳細な近似、簡易式/Wallaceは概算として使われます。
塩濃度（Na+）はTmに影響しますか？
一般に影響します。塩濃度が高いほど二本鎖が安定し、Tmが上がる傾向があります。
Forward/ReverseでTmが違うときは？
ΔTmが大きい場合は、温度探索の幅を持たせる（温度勾配PCR）などの目安になります。必要ならプライマー設計の見直しも検討してください。
入力した配列やデータは送信されますか？
いいえ。計算はすべてブラウザ内で行われ、データは送信されません。
関連ツール
- PCR反応液を作るなら → PCR マスターミックス計算機
- qPCRの解析なら → qPCR 標準曲線 → ΔCt / ΔΔCt
- テンプレ濃度の確認なら → A260 濃度・純度
- 単位換算なら → DNA/RNA 変換
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