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PCR 分子生物

PCR反応液(マスターミックス)計算:反応数・最終濃度・余裕分

PCR/qPCRの反応体積・反応数と、ストック濃度/最終濃度から、各試薬の必要量(µL)をマスターミックスとして自動計算します。余裕分(%や+1反応)や96/384ウェルにも対応し、手順文(プロトコル)をそのままコピーできます。

計算はすべてブラウザ内で行われ、データは送信されません。

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使い方(3ステップ)

  1. 例題を選ぶか、反応体積・反応数(または96/384ウェル)を入力します。
  2. 余裕分(10%など)と、成分(2×mix・プライマーなど)を設定します。
  3. 1反応あたりの量、余裕分込みの総量、分注手順が表示されます。

ここで行うのは“量の計算”です。実験条件の最適化(温度、サイクル、試薬選定など)は別途必要です。

入力

反応規模

一般にテンプレートは別添加にすることが多いです(汚染リスクやサンプル差を避けるため)。

成分(簡単モード)

水は自動で残量(反応体積に合わせて調整)になります。

結果

反応数(wells)
準備する反応数(余裕分込み)
反応体積
各ウェルへの分注量(マスターミックス)
マスターミックス総量

成分表

成分 1反応あたり(µL) 総量(µL) 備考

※ 表は横スクロールできます。

“別添加” はテンプレートなど、通常マスターミックスに入れない成分の目安です。

手順文(プロトコル)
共有URL / エクスポート

共有URLには入力(成分を含む)が保存されます。URLが長くなる場合があります。

計算の流れ(How it’s calculated)

ここで行うのは“量の計算”です。成功を保証するものではありません。

よくある質問(FAQ)

マスターミックスとは何ですか?

複数反応で共通の成分(バッファ、酵素など)をまとめて混ぜて作り、各ウェルに同量ずつ分注する混合液です。ピペット回数を減らし、ミスやばらつきを減らせます。

余裕分(オーバー)はどれくらい入れればいいですか?

目安として5〜10%や「+1反応分」がよく使われます。分注方法や反応数に合わせて調整してください。

2×(または5×)マスターミックスはどう入力しますか?

×濃度として入力します。例えば2×を最終1×にしたい場合、反応体積の半分量が目安になります(計算で自動化します)。

テンプレート(DNA/cDNA)はマスターミックスに入れるべきですか?

一般には汚染リスクやサンプル差を避けるため、テンプレートは別添加にすることが多いです。このツールでも既定では“別添加”で計算します(切替可能)。

水の量がマイナスになりました。

成分の合計体積が反応体積を超えています。反応体積を増やすか、成分(特にテンプレ体積や高濃度成分)を見直してください。

0.1 µLなど極端に小さい体積が出ました。

分注誤差が大きくなるため注意が必要です。中間希釈(プライマーを薄める等)や反応体積の調整を検討してください。

qPCRでも使えますか?

使えます。2×qPCR mixやプライマー濃度を入力すれば同じ計算で総量を出せます。

フィードバック

このツールの改善に役立てるため、間違いの指摘や「こうしたい」などの要望があれば教えてください。