NGS konsentrasi perpustakaan (ng/µL → nM) | pengenceran & pengumpulan

Cara menggunakan (3 langkah)

Pilih contoh atau masukkan konsentrasi perpustakaan (ng/µL atau nM) dan panjang fragmen (bp).
Pilih target nM dan volume akhir untuk melihat resep pengenceran (kaldu + air).
Pilih metode pengumpulan dan tinjau volume per perpustakaan dan kumpulan nM (panduan).

Konversi ke nM bergantung pada panjang, faktor MW, dan metode kuantifikasi. Perlakukan hasil sebagai panduan dan ikuti protokol Anda untuk pengambilan keputusan akhir.

Input (tabel perpustakaan)

Contoh (yang telah ditetapkan)

—

Tempel (CSV/TSV)

Tempel langsung dari Excel/Sheets (tab atau dipisahkan koma). Contoh kolom: name, ng_per_uL, length_bp, nM (nama kolom bisa bermacam-macam).

Nama	Modus masukan	ng/µL	Panjang (bp/nt)	nM (masukan)	Konsentrasi (nM)	Tindakan

Tabel bergulir secara horizontal (geser atau seret).

Jenis molekul (dsDNA, dll.)

Jenis molekul Faktor MW (g/mol/bp atau nt)

dsDNA (660 g/mol/bp) adalah panduan umum untuk NGS. Nilai dapat bervariasi menurut metode dan definisi.

Normalisasi (encerkan agar sesuai dengan nM)

Target nM telah ditetapkan sebelumnya Konsentrasi target (nM)

Prasetel volume akhir Volume akhir (µL)

Penggabungan

Metode

Volume per perpustakaan (µL)

Hasil (konversi, pengenceran, pengumpulan)

Nama	Stok (nM)	Pengenceran: stok (µL)	Pengenceran: air (µL)	Volume kolam (µL)

—

Bagaimana cara menghitungnya

Konversi (panduan): nM = (ng/µL) × 1e6 / (panjang × MW_per_bp)
Pengenceran: C1V1 = C2V2 (V_stock = (C_target/C_stock) × V_final)
Penggabungan molar sama langsung: alokasikan volume sehingga C_i × V_i sama (diberikan volume total)

Konversi tergantung pada panjang, faktor MW, dan metode kuantifikasi. Gunakan hasil ini sebagai panduan.

FAQ

Untuk apa konversi ng/µL → nM?

Gunakan untuk menormalkan perpustakaan berdasarkan jumlah molekul untuk pengumpulan molar yang sama (berbeda dari massa yang sama).

Di mana saya mendapatkan panjang fragmen (bp)?

Gunakan ukuran rata-rata dari laporan Bioanalyzer/TapeStation. Jaga agar penyertaan adaptor tetap konsisten dengan definisi laporan.

Apa perbedaan antara penyatuan massa yang sama dan molar yang sama?

Massa yang sama cocok dengan nilai ng, sedangkan molar yang sama cocok dengan jumlah molekul (nM). Jika panjangnya berbeda, massa yang sama tidak akan menyamakan jumlah molekul.

Apa itu normalisasi?

Normalisasikan dengan mengencerkan semua perpustakaan ke nM yang sama, lalu kumpulkan volume yang sama. Alat ini menyediakan aliran yang direkomendasikan.

Volume pengenceran terlalu kecil (misalnya 0,2 µL).

Volume yang sangat kecil sulit untuk dipipet. Pertimbangkan pengenceran menengah atau sesuaikan volume akhir.

Bisakah saya menggunakan nilai nM (atau pM) dari qPCR?

Ya. Gunakan mode input nM langsung. Perhatikan bahwa definisi kuantifikasi dapat berbeda menurut metodenya.

Apakah konsentrasi yang dikumpulkan akan tepat?

Ini adalah panduan. Kesalahan penghitungan dan pemipetan serta variasi panjang fragmen dapat menggeser nilai akhir.

Komentar

Laporkan masalah, permintaan, atau kasus penggunaan (komentar dimuat sesuai permintaan).