كيفية الاستخدام (3 خطوات)
- اختر مثالاً أو أدخل تركيز المكتبة (نانوغرام/ميليلتر أو نانومتر) وطول القطعة (bp).
- حدد الهدف نانومتر والحجم النهائي لرؤية وصفة التخفيف (المخزون + الماء).
- اختر أسلوب تجميع ومراجعة وحدات التخزين لكل مكتبة وnM المجمعة (الدليل).
يعتمد التحويل إلى nM على الطول وعوامل MW وطريقة القياس الكمي. تعامل مع النتائج كدليل واتبع البروتوكول الخاص بك لاتخاذ القرارات النهائية.
المدخلات (جدول المكتبة)
النتائج (التحويل، التخفيف، التجميع)
| الاسم | المخزون (نانومتر) | التخفيف: المخزون (ميليلتر) | التخفيف: الماء (ميليلتر) | حجم البركة (ميليلتر) |
|---|
—
كيف يتم حسابها
- التحويل (الدليل): نانومتر = (نانوغرام/ميليلتر) × 1e6 / (الطول × MW_per_bp)
- التخفيف: C1V1 = C2V2 (V_stock = (C_target/C_stock) × V_final)
- التجميع المولي المتساوي المباشر: قم بتخصيص الأحجام بحيث يكون C_i × V_i متساويًا (بالنظر إلى الحجم الإجمالي)
يعتمد التحويل على الطول وعوامل MW وطريقة القياس الكمي. استخدم هذه النتائج كدليل.
الأسئلة الشائعة
ما هو تحويل ng/μL → nM المستخدم؟
استخدمه لتطبيع المكتبات عن طريق تعداد الجزيئات لتجميع المولي المتساوي (يختلف عن الكتلة المتساوية).
من أين يمكنني الحصول على طول الجزء (bp)؟
استخدم متوسط الحجم من تقرير Bioanalyzer/TapeStation. حافظ على توافق تضمين المحول مع تعريف التقرير.
ما الفرق بين التجميع المتساوي الكتلة والتجميع المولي المتساوي؟
تتطابق الكتلة المتساوية مع قيم ng، بينما تتطابق المولي المتساوية مع عدد الجزيئات (nM). إذا اختلفت الأطوال، فإن الكتلة المتساوية لن تعادل عدد الجزيئات.
ما هو التطبيع؟
تطبيع عن طريق تمييع كافة المكتبات لنفس نانومتر، ثم تجميع وحدات تخزين متساوية. توفر هذه الأداة التدفق الموصى به.
حجم التخفيف صغير جدًا (على سبيل المثال، 0.2 ميكرولتر).
من الصعب ماصة كميات صغيرة جدًا. فكر في التخفيف المتوسط أو ضبط الحجم النهائي.
هل يمكنني استخدام قيم nM (أو pM) من qPCR؟
نعم. استخدم وضع الإدخال المباشر نانومتر. لاحظ أن تعريفات القياس الكمي يمكن أن تختلف حسب الطريقة.
هل سيكون التركيز المجمع دقيقًا؟
إنه دليل. أخطاء القياس الكمي وpipetting واختلاف طول الجزء يمكن أن تحول القيمة النهائية.
الأدوات ذات الصلة
التعليقات
الإبلاغ عن المشكلات أو الطلبات أو حالات الاستخدام (يتم تحميل التعليقات عند الطلب).