كيفية الاستخدام (3 خطوات)
- حدد مثالاً أو أدخل طول القطعة (bp) والتركيز (نانوغرام/ميليلتر) للعمود الفقري والإدراج.
- اختر النسبة المولية (على سبيل المثال، إدراج 2 ×) ومبلغ العمود الفقري (pmol أو نانوغرام).
- سوف تظهر الكتلة المطلوبة (نانوغرام) والحجم (ميكرولتر)، بالإضافة إلى وصفة (المزيج الرئيسي/الكواشف والمياه المتبقية).
هذه هي حاسبة الكمية. تختلف الشروط الموصى بها حسب المجموعة والبروتوكول، لذا اتبع البروتوكول الخاص بك. Golden Gate الإعدادات المسبقة للكاشف هي أمثلة للحساب فقط.
المدخلات (جدول الأجزاء)
النتائج
المياه المتبقية (ميليلتر)
—
إجمالي حجم DNA (ميليلتر)
—
إجمالي DNA الكتلة (نانوغرام)
—
2 × مزيج رئيسي الحجم (ميليلتر)
—
| جزء | الدور | الطول (نقطة أساس) | الهدف (بمول) | الكتلة (نانوغرام) | الحجم (ميليلتر) | ملاحظة |
|---|
يمكن للمشاركة URL استعادة مدخلاتك (مفاتيح اللغة الإنجليزية الثابتة).
هذه الأداة تحسب المبالغ فقط. لا يضمن النجاح.
كيف يتم حسابها
- كتقريب dsDNA، بمول = (mass_ng × 1000) / (bp × 660).
- قم بتعيين مقدار العمود الفقري (pmol لـ Gibson، ng لـ Golden Gate) وحساب العمود الفقري pmol.
- كل هدف إدراج هو Insert_target_pmol = backbone_pmol × النسبةثم تحويلها إلى كتلة (ng).
- إذا كان التركيز (نانوغرام/ميكرولتر) معروفًا، الحجم = الكتلة / conc يعطي الحجم (ميكرولتر).
- يتم حساب الماء المتبقي من إجمالي حجم التفاعل مطروحًا منه المزيج الرئيسي/الكواشف وحجم DNA.
القيم هي أدلة. اتبع المجموعة/البروتوكول الخاص بك للحصول على الشروط النهائية.
الأسئلة الشائعة
ما الفرق بين Gibson و Golden Gate؟
يقوم كلاهما بتجميع أجزاء DNA، لكن آليات التفاعل والإنزيمات تختلف. تحسب هذه الأداة مقدار DNA المراد مزجه.
لماذا استخدام النسب المولية؟
الأجزاء ذات الأطوال المختلفة لها تعداد جزيئي مختلف بنفس الكتلة. تحافظ النسب المولية على ثبات عدد الجزيئات.
ما هي النسب المستخدمة عادة؟
كقاعدة عامة، غالبًا ما تكون الإدخالات 2× أو 3× العمود الفقري. ذلك يعتمد على التجميع ويجب اختباره.
هل يمكنني استخدام هذا بدون قيم التركيز؟
نعم. لا يزال بإمكانك حساب الكتلة المطلوبة (نانوغرام). تظهر وحدات التخزين (ميكرولتر) فقط عند توفير التركيزات.
وحدات التخزين الخاصة بي صغيرة للغاية (على سبيل المثال، 0.1 ميكرولتر).
الكميات الصغيرة جدًا معرضة للخطأ. النظر في التخفيفات المتوسطة أو ضبط كمية العمود الفقري وحجم التفاعل.
هل يمكنني استخدام الإعدادات المسبقة للكاشف Golden Gate كما هي؟
تعتمد أحجام الكاشف على المجموعة والبروتوكول. الإعدادات المسبقة هي أمثلة للحساب فقط؛ اتبع البروتوكول الخاص بك.
فهل هذه المبالغ تضمن النجاح؟
لا، هذه الأداة تقوم بحساب المبالغ فقط. يعتمد النجاح على التصميم والجودة DNA وظروف التفاعل.