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NGS 实验室工作流程

NGS 文库浓度:ng/μL → nM,稀释,合并

将 NGS 文库浓度从 ng/μL 和片段长度 (bp) 转换为 nM,然后计算标准化稀释度和合并(等体积或等摩尔)。支持多样本表和复制/导出。

所有计算都在您的浏览器中运行。没有发送任何数据。

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使用方法(3步)

  1. 选择一个示例或输入文库浓度(ng/μL 或 nM)和片段长度 (bp)。
  2. 选择目标 nM 和最终体积以查看稀释配方(原液 + 水)。
  3. 选择合并方法并查看每个文库的卷和合并的 nM(指南)。

转换为 nM 取决于长度、MW 因素和定量方法。将结果作为指导并遵循您的方案做出最终决定。

输入(库表)

直接从 Excel/Sheets 粘贴(制表符或逗号分隔)。示例列:name、ng_per_uL、length_bp、nM(列名称可能有所不同)。

名称 输入方式 纳克/微升 长度(bp/nt) nM(输入) 浓度 (nM) 行动

表格水平滚动(滑动或拖动)。

分子类型(dsDNA等)

dsDNA (660 g/mol/bp) 是 NGS 的通用指南。值可能因方法和定义而异。

标准化(稀释以匹配 nM)

池化

结果(转换、稀释、合并)

名称 库存 (nM) 稀释:原液 (µL) 稀释:水 (μL) 池体积 (µL)

计算方法

转换取决于长度、MW 系数和量化方法。使用这些结果作为指导。

常见问题

ng/μL → nM 转换有何用途?

使用它通过分子计数对文库进行标准化,以进行等摩尔合并(不同于等质量)。

从哪里可以获得片段长度 (bp)?

使用生物分析仪/TapeStation 报告中的平均大小。保持适配器包含与报告定义一致。

等质量和等摩尔池有什么区别?

等质量匹配 ng 值,等摩尔匹配分子计数 (nM)。如果长度不同,则相同的质量不会使分子计数相等。

什么是常态化?

通过将所有文库稀释至相同 nM 进行标准化,然后合并等体积。该工具提供了推荐的流程。

稀释体积太小(例如 0.2 µL)。

非常小的体积很难移液。考虑中间稀释或调整最终体积。

我可以使用 qPCR 中的 nM(或 pM)值吗?

是的。使用直接nM输入模式。请注意,量化定义可能因方法而异。

合并浓度准确吗?

它是一个指南。定量和移液错误以及片段长度变化可能会改变最终值。

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