使用方法(3步)
- 选择一个示例或输入文库浓度(ng/μL 或 nM)和片段长度 (bp)。
- 选择目标 nM 和最终体积以查看稀释配方(原液 + 水)。
- 选择合并方法并查看每个文库的卷和合并的 nM(指南)。
转换为 nM 取决于长度、MW 因素和定量方法。将结果作为指导并遵循您的方案做出最终决定。
输入(库表)
结果(转换、稀释、合并)
| 名称 | 库存 (nM) | 稀释:原液 (µL) | 稀释:水 (μL) | 池体积 (µL) |
|---|
—
计算方法
- 换算(指南):nM = (ng/μL) × 1e6 / (长度 × MW_per_bp)
- 稀释:C1V1 = C2V2 (V_stock = (C_target/C_stock) × V_final)
- 直接等摩尔池:分配体积,使 C_i × V_i 相等(给定总体积)
转换取决于长度、MW 系数和量化方法。使用这些结果作为指导。
常见问题
ng/μL → nM 转换有何用途?
使用它通过分子计数对文库进行标准化,以进行等摩尔合并(不同于等质量)。
从哪里可以获得片段长度 (bp)?
使用生物分析仪/TapeStation 报告中的平均大小。保持适配器包含与报告定义一致。
等质量和等摩尔池有什么区别?
等质量匹配 ng 值,等摩尔匹配分子计数 (nM)。如果长度不同,则相同的质量不会使分子计数相等。
什么是常态化?
通过将所有文库稀释至相同 nM 进行标准化,然后合并等体积。该工具提供了推荐的流程。
稀释体积太小(例如 0.2 µL)。
非常小的体积很难移液。考虑中间稀释或调整最终体积。
我可以使用 qPCR 中的 nM(或 pM)值吗?
是的。使用直接nM输入模式。请注意,量化定义可能因方法而异。
合并浓度准确吗?
它是一个指南。定量和移液错误以及片段长度变化可能会改变最终值。
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