Rumah / Sains & teknik / Biologi / DNA campuran perakitan

← Biologi

Biologi molekuler Kloning

DNA Kalkulator Campuran Rakitan (Gibson / Golden Gate)

Hitung massa dan volume DNA yang diperlukan dari rasio tulang punggung/masukkan molar untuk Gibson atau Golden Gate. Jika konsentrasi diberikan, volume dan sisa air untuk reaksi total dihitung.

Semua perhitungan dijalankan di browser Anda. Tidak ada data yang dikirim.

Bahasa lain ja | en | zh-CN | es | pt-BR | id | fr | hi-IN | ar

Cara menggunakan (3 langkah)

  1. Pilih contoh atau masukkan panjang fragmen (bp) dan konsentrasi (ng/µL) untuk tulang punggung dan sisipan.
  2. Pilih rasio molar (misalnya, sisipan 2×) dan jumlah tulang punggung (pmol atau ng).
  3. Massa (ng) dan volume (µL) yang diperlukan, ditambah resep (campuran utama/reagen dan sisa air), akan muncul.

Ini adalah kalkulator kuantitas. Kondisi yang direkomendasikan bervariasi menurut kit dan protokol, jadi ikuti protokol Anda. Golden Gate preset reagen hanyalah contoh untuk perhitungan saja.

Input (tabel fragmen)

—

Rasio molar mencerminkan jumlah molekul. Panjang yang berbeda berarti jumlah molekul yang berbeda pada massa yang sama.
Detail (berat molekul per bp)
Gunakan 660 g/mol/bp sebagai nilai perkiraan untuk dsDNA.
Nama Peran Panjang (bp) Konsentrasi (ng/µL) Tindakan
Tempel TSV (opsional)

Tempel dari Excel/Sheets (dipisahkan tab).

Hasil

Sisa air (µL)
—
Total volume DNA (µL)
—
Total DNA massa (ng)
—
2× campuran utama volume (µL)
—
Fragmen Peran Panjang (bp) Sasaran (pmol) Massa (ng) Volume (µL) Catatan

Alat ini hanya menghitung jumlah. Itu tidak menjamin kesuksesan.

Bagaimana cara menghitungnya

  1. Sebagai perkiraan dsDNA, pmol = (mass_ng × 1000) / (bp × 660).
  2. Tetapkan jumlah backbone (pmol untuk Gibson, ng untuk Golden Gate) dan hitung pmol backbone.
  3. Setiap target penyisipan adalah insert_target_pmol = backbone_pmol × rasio, kemudian diubah menjadi massa (ng).
  4. Jika konsentrasi (ng/µL) diketahui, volume = massa / konsentrasi memberikan volume (µL).
  5. Air yang tersisa dihitung dari total volume reaksi dikurangi campuran induk/reagen dan volume DNA.

Nilai adalah panduan. Ikuti kit/protokol Anda untuk kondisi akhir.

FAQ

Apa perbedaan antara Gibson dan Golden Gate?
Keduanya merakit fragmen DNA, tetapi mekanisme reaksi dan enzimnya berbeda. Alat ini menghitung berapa banyak DNA yang harus dicampur.
Mengapa menggunakan rasio molar?
Fragmen dengan panjang berbeda memiliki jumlah molekul berbeda pada massa yang sama. Rasio molar menjaga jumlah molekul tetap konsisten.
Rasio apa yang biasa digunakan?
Sebagai aturan praktis, sisipan sering kali berukuran 2× atau 3× pada tulang punggung. Itu tergantung pada perakitan dan harus diuji.
Bisakah saya menggunakan ini tanpa nilai konsentrasi?
Ya. Anda masih dapat menghitung massa yang dibutuhkan (ng). Volume (µL) ditampilkan hanya jika konsentrasi disediakan.
Volume saya sangat kecil (misalnya 0,1 µL).
Volume yang sangat kecil rawan kesalahan. Pertimbangkan pengenceran menengah atau sesuaikan jumlah tulang punggung dan volume reaksi.
Dapatkah saya menggunakan preset reagen Golden Gate sebagaimana adanya?
Volume reagen bergantung pada kit dan protokol. Preset hanyalah contoh untuk perhitungan saja; ikuti protokol Anda.
Akankah jumlah ini menjamin kesuksesan?
Tidak. Alat ini hanya menghitung jumlah. Keberhasilan bergantung pada desain, kualitas DNA, dan kondisi reaksi.